葛根为豆科植物野葛Puemilbata(WilH)Ohw的干燥根，习称野葛。具有解肌退热，生津，透疹，升阳止泻之功效。用于外感发热头痛、项背强痛、口渴、消渴、麻疹不透、热痢、泄泻，高血压颈项强痛等疾病。异黄酮类化合物是葛根的主要成分；其中葛根素是葛根的特有成分，在治疗心血管系统疾病上有着广泛的应用前文报道了从葛根乙醇提取物的水部位分离得到11个异黄酮碳苷类化合物。在对葛根化学成分的进一步研究中，从葛根乙醇提取物的石油醚，醋酸乙酯和正丁醇部位分离并鉴定了22个化合物；其中化合物15-8151821和22为本种植物中首次分离得到，化合物1，5-7151821和22为从本属植物中首次分离得到。
1材料
BUerAvance300和BiukerAance500型核磁共振仪；Agiet100SeiesLC/MJDTaP质谱仪；柱色谱用硅胶（200-300目，青岛海洋化工集团）薄层色谱硅胶预制板（烟台市化学工业研究所）Waer:分析型高效液相色谱仪；Agilent1100series制备型高效液相色谱仪；制备型色谱柱：AgilentpeP-C8(50mmx250mm10PhenonenexSYnergi4p〇la-RP(0mmx250mm4Mm)AltchAltmaqs(2mmX250mm10ym)分析型色谱柱：PhenomenexSynegi4pP〇^nRP(4_6mmx250mm4Mm)AltchAlmaC8(4.6mmx250mm5Mm)。柱色谱和萃取所用石油醚、醋酸乙酯、氯仿、正丁醇和甲醇均为分析纯（Un-Chm)HPLC级甲醇购自Men%纯水经Mill-Q纯化系统纯化；混合溶剂比例为体积比。葛根原药材购于安徽省金寨县，经广东省中药研究所张现涛鉴定为野葛POba〇的干燥根，标本保存于澳门大学中华医药研究院。
2提取和分离
干燥葛根药材20kg加200L95%乙醇热回流提取3次，得流浸膏3.3kg取流浸膏2.9kg用3倍量去离子水稀释，搅拌使之混匀后，依次用石油醚，醋酸乙酯，正丁醇萃取;将萃取层旋干后得石油醚部位提取物98.4g醋酸乙酯部位提取物160g正丁醇部位提取物1108g卩水部位提取物935g将葛根石油醚部位（98.4g反复硅胶柱色谱，以石油醚醋酸乙酯梯度（100:0-0:100)先脱，得到1(30mg2(200mg3(200mg4(300mg,5(5mg5个化合物以及化合物6和7的混合物，化合物6和7的混合物通过制备高效液相[色谱柱PhenomenexSynergi4mP〇la-RP30250mm4Mm)流速10mL。miff1;甲醇水（MOH-HO85:15)]分离得到化合物6(5mg和7(5mg将葛根醋酸乙酯部位（160g经硅胶柱色谱，氯仿甲醇（00D~1:1)洗脱，得到21个组分（EF1~EI21)。EF经硅胶柱色谱，氯仿甲醇梯度(100D~1:1)洗脱得化合物8(10mg和12(80mg。EF11经硅胶柱色谱，氯仿甲醇梯度洗脱得化9(20mg)11(6.4g13(260mg和14(150mg。EF12经ODS柱色谱，MOH-HO梯度（20:80~0:100)洗脱，并进一步通过制备高效液相[色谱柱PhmcmenexSynergi4,uP〇la-RP柱（30mmx250mm4Mm)流动相MOH-HO(0:50);流速10mL。mn1]纯化得到化合物15(8mg。EF15经硅胶柱色谱，氯仿甲醇梯度洗脱得化合物16(70mg。EF17经硅胶柱色谱，氯仿甲醇梯度洗脱得化合物17(4.2g。E20经硅胶柱色谱，氯仿甲醇梯度洗脱得化合物1030mg。
葛根正丁醇部位提取物（2049g经硅胶柱色谱，氯仿甲醇（95:5~1:1)洗脱，得到13个组分(BF1~BF13。BF2经反复重结晶得到化合物11(15mg。BF~合并后经制备高效液相[Agilent
PeP-C色谱柱（50mmX250mm10pm)流动相
Me:H-H〇(60:40)流速50mL。miff1]，分离得化
合物11(5mg)14(25mg18(2mg和组分.1经制备高效液相[PhnonnexSnegi4ppolarRP色谱柱（0mmX250mm4Mm)流动相M(H-HO(60:40)流速10mL。mn1]分离得到化合物19(2mgBF经反复重结晶得到化合物20(40mg。BF和BF合并后经制备高效液相[Ag-
lntPeP-C色谱柱（50mmX250mm10Pm)流动
相MOH-HO(50:50)流速50mL。mn1]分离得化合物14(25mg4'甲氧基葛根素（6mg以及组分BF.1和BF.2BF.2经制备高效液相[PhencmenexSynegi4PP〇latRP色谱柱（30_X250mm4Pm)流动相MOH-HO(50:50)流速10mL。mn1]分离得到葛根素（2mg和化合物21(2mg。BF3经制备高效液相[AgilntPeP-；色谱柱(50mmx250mm10Pm)流动相MOH-HO(25:75)流速50mL。mn1]分离得3'羟基葛根素（0mg葛根素4-3葡萄糖苷（8mg)和化合物22(2mg3结构鉴定
化合物1白色无定形粉末（甲醇）1H-NMR
(CDCi300MHZS5.37(1HdJ=5.3H，zH-7)
463(1HmH-3)1.25(多个HmCH)1.02(HSH-19)0.80~0.94(15Hm5XCH)0.68(HSH-18>;3CNMR(CDCi75MHZS37.0(C1)27.8(C2)73.7(C3)38.2(C4)139.7(C5)122.6(C6)，31.9(C7)31.9(C8)50.0(C9)36.6(C-10)21.0(C11)，39.7(C-12)42.3(C13)56.7(C-14)24.3(C-15)28.2(C-16)56.0(017)11.8(018)19.3(C49)，36.1(C-20)18.8(C21)，33.9(C22)26.1(C23)45.8(C24)29.1(C25)19.8(C-26)19.0(C27)23.1(C-28)12.0(C-29)173.3(C-1'34.7(C-2’)，25.1(C3’）29.1~29.7(C4’~C13’）31.9(C14'22.7(C15')14.1(C16')。以上数据与文献[5]报道一致，故确定化合物1为卩谷甾醇棕榈酸酯。
化合物3白色无定形粉末（甲醇）ES-MSm/Z405[M+H|+;1H-NMR(DMS:X4300MHZ
57.67(1HdJ=8.4H，zH-7)，7.60(1HSH-10)7.11(HdJ=2.0HzH-10)6.92(1H却J=8..20HzH-8)6.91(HSH4)5.34(HmH-13)5.11(HmH-17)3.34(2HdJ=6.8HzH-12)206(4HmH-1516)1.68(3HSH-19)1.65(3H，SH-20)1.57(3H，SH-21)
13CNMRCDMSXd75MHZS126.4(C1)，1146(C1a)123.9(C2)159.4(C3)，101.9(C4)152.8(C4a。157.6(102.3(C-3a。120.8(C-7)113.9(C7a。103.7(〇8)155.9(C9)98.5(C-10)156.9(C-10a)158.9(C-11a。27.2(C-12)120.5(C-13)136.1(C-14)39.1(C-15)26.0(C16)，121.5(017)130.8(C18)17.5(C19)
25.4(C20)15.8(C21)。以上数据与文献[6]报道一致，故确定化合物3为葛香豆雌酚（Peiaro)化合物4白色无定形粉末（醋酸乙酯石油醚）1H-NMR(CDCl300MHZS469(1HdJ=24HZH.,-29)4.56(HmH,-29)3.19(1H却J=5.210.8H，zH-3a)1.68(3H，SH-30)1.03(HSH-26)0.97(3HSH-23)0.94(3HSH-27)0.83(3H，SH-25)0.79(3H，SH-28)0.76(3HSH-24)13CNMR(CDCl75MHZS38.7(C1)27.4(C2)79.0(C3)38.8(C-4)55.3(C5)18.3(C6)34.3(C-7)40.8(C8)50.4(〇9)372(C-10)20.9(C-11)25.1(C-12)38.0(C43)428(Cl4)27.4(C-l5)35.6(C-16)43.0(Cl7)483(Cl8)，48.0(Cl9)151.0(C20)298(C21)40.0(C22)280(〇23)15.4(C24)161(C-25)160(C-26)14.5(C-27)18.0(〇28)109.3(〇29)19.3(030)。以上数据与文献[7]报道一致，故确定化合物4为羽扇豆醇（lupeo)。
化合物5白色无定形粉末（醋酸乙酯石油醚）'H-NMR(CDC1300MHZS469(HdJ=2.3H，zH.,-29)457(dJ=2.3HzH,-29)1.72(3HSH-20)1.05(6HSH-2326)，1.02(3H，SH-24)0.95(H，SH-27)0.93(3H，SH-25)，
0.80(3HSH-28)13CNMR(CDq75MHZS39.6(Cl)34.1(〇2)218.1(C3)47.3(C-4),549(C5)19.7(Cs)33.6(C7)40.8(C8)，49.8(C9)369(C-10)21.5(Cll)25.1(Cl2)38.1(C-13)42.9(C-14)27.4(C-15)35.5(C-16)43.0(C17)48.2(Cl8)47.9(C19)150.9(-20)29.8(-21)40.0(-22)26.6(-23)，21.0(C24)16.0(C25)15.8(C26)14.5(C-27)18.0(-28)109.4(-29)19.30(-30)。以上数据与文献[7]报道一致，故确定化合物5为羽扇豆酮（UPeone)。
化合物6淡黄色油状物；1H-NMR(EMSad，500MHZS7.73(2HddJ=5.73.3H，zH-25)，
7.66(2HddJ=5.73.3HZH-34)，4.01(4HdJ=6.4HZH-1;1")，250(2HmH-2，’2")0.92
(12HdJ=6.7HZH-3，’4，’3;’4")13CNMR(EMSCXd125MHZS167.3(-CCD-)132.2(C^l6)，129.0(-25)131.9(C-34)71.6(Cl;l"27.7(C2,2")19.3(C3;4,3"4")。以上数
据与文献[8]报道一致，鉴定为邻苯二甲酸二异丁酯（diisobuylPhhalae)。
化合物7淡黄色油状物；1H-NVIR(EMSC-d500MHZS7.71(2HmH-25)7.67(2HmH-3
4)，415417(eah2HddJ=11.05.4HZH-1，
l"1.63(2HmH-2,2"1.20~1.40(16HmH-3,4,5,7,3"4"5"7")0.88(6HtJ=6.8HZH-8,8"0.86(6HtJ=6.8Hz6"
13CNMR(EMS:)d125MHZS166.9(-COD),131.7(C-16)128.6(C25)，131.5(C34)，
67.3(Cl，l"38.0(C2,2")29.7(C3,3")
23.2(C4,4"223(C5,5")10.7(C-5;6")
28.3(C7,7"13.8(C8,8"以上数据与文献[9]报道一致，鉴定为邻苯二甲酸二（2乙基）己酯[biS2-tylhexy)Phhalae。
化合物8淡黄色无定形粉末；1H-NVIR(CMS-d500MHZS10.7(lHS3-)H)7.86(HdJ=8.6HzH-l)7.61(lHSH-7)7.25
(H，SH-10)6.95(HddJ=8.622HZH-2)
6.91(lHdJ=2.2HzH-4)6.63(1HdJ=9.8HzH4’)，5.84(lHdJ=9.8HZH-3，1.43(6H
4H-5;6，13CNMR(EMSOd，125MHZS122.7(Cl)1040(Cla)113.8(C2)，161.4(C-3)103.0(C-4)161.3(C-4a),157.4(C-6)101.8(C-
5a)117.2(0-7)116.3(〇7，),119.5(C-8)152.0(C9)100.0(C-10)155.0(Cl0a)159.9(-11a)76.7(C2’）131.0(C3’）121.8(C4’）27.5
(CC5;6’以上数据与文献报道一致|101,故确定化合物8为槐香豆素A(scphoacomestanA)。
化合物151H-NVIR(EMS3-(d500MHZS10.67(lHbrs7-:)H)8.97(2Hbrs3’-:)H4’-〇H〉8.26(lH,sH-2)7.97(lHdJ=8.6HzH-
5)7.03(HdJ=2.1HZH-2’6.93(lHdJ=8.8HzH6)6.85(HbSHg),6.82(lHddJ=
8.321HzH6’6.78(lHdJ=8.3HZH-
5’13C-NMR(EMS>d125MHZS152.7(C2)
123.6(C-3)174.7(C4)，116.6(C4a)l27.3(C-
5)115.1(C-6)162.5(C-7)，102.1(C8)157.4(C8a)123.0(Cl’116.7(C2’1448(C3’）145.2(C4’115.3(C-5’119.9(CV)。以上数据与文献[11]报道一致，故确定化合物15为3'羟基大豆苷元（3’-hyd〇ydadzen)。
化合物21白色无定形粉末（甲醇）1H-NMR(EMS:Xd300MHZ)S5.77(lHSH4)5.77
(2HmH-78)432(H?J=6.0HzH-9)
417(lHdJ=7.8HzH-1’243(lHdJ=16.8HZH,-2)2.08(lHdJ=16.8HZH,-2)1.81(HdJ=1.2HZH-13)1.18(3HdJ=6.3HzH-10)0.93(3HSH-12)0.93(3HSH-11)
13CNMR(EMSad75MHZS40.9(Cl),49.3(匕2)197.3(C3)125.6(C4)163.9(C5)76.8(C-
130.3(C-7)133.3(C8)74.5(C9)20.9(C-10)24.1(C-11)23.0(C12)18.8(C43)100.9
(Cl73.7(C2)76.9(C-370.0(〇4’)，77.8
(C5)61.1(〇6')。以上资料与文献报道一致|12,故确定化合物21为（6$9R)长寿花糖苷。
其余化合物与文献数据比较分别被鉴定为：P-谷甾醇（2)1131，香豆雌酚（9)114,尿囊素（10)|15]，大豆苷元（1)芒柄花素（12)1141，3'甲氧基大豆苷元（3)芒柄花苷（14)1161，染料木苷（16)，大豆苷
(17)甲氧基芒柄花苷，羟基芒柄花苷（19)[18，(^)-PueiolB2-(3-glu〇〇Pyianoside
(20)蔗糖（22)|2<1。
4讨论
本研究中分离得到22个化合物，其主要成分为异黄酮类成分，与此前葛根成分研究结果一致。作者同时从本研究中分离得到了两个微量的邻苯二甲酸酯类化合物，此类成分在多种中药成分研究中被分离得到，而邻苯二甲酸酯类化合物是一类环境内分泌干扰素，具有致畸、致癌、致突变性和遗传毒，因此在未来中药质量控制研究中对这一类成分的控制研究值得关注。
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