摘 要：目的：采用荧光PCR法对手足口病患儿进行病原学检测，分析手足口病病毒分型。方法：采集1 166例临床确诊手足口病患儿的肛拭子及咽拭子，采用荧光核酸检测试剂盒进行肠道病毒筛选，对两种常见肠道病毒进行归纳比较。结果：1 166例患者中以埃可病毒属感染为主，EV71明显多于Cox A16，P＜0.005；在Cox A16阳性病例中多有埃可病毒协同感染。结论：注重埃可病毒感染手足口病患者的防治工作，EV71感染的患者须注意重症患者的出现。
关键词：手足口病；病毒感染；荧光定量PCR；柯萨奇病毒A组16型；肠道病毒71型
手足口病（Hand-foot-mouth disease，HFMD）是多种肠道病毒感染引起的常见传染病，引发手足口病的肠道病毒已发现有20多种（型），柯萨奇病毒A组的16、4、5、9、10型，B组的2、5型，以及肠道埃可病毒71型（EV71）均为手足口病较常见的病原体，其中以柯萨奇病毒A16型（Cox A16）和EV71型最为常见[1]。手足口病多发生于学龄前儿童，尤以4岁以下年龄组发病率最高，其重要临床表现为：发热、手、足、口腔等部位的斑丘疹、疱疹、食欲不振、口腔疼痛、流涎、咳嗽；严重病例可出现头痛、呕吐、腹泻、易惊、肢体抖动、抽搐、嗜睡或烦躁、精神萎靡、面色苍白、偏瘫，甚至呼吸困难、心跳骤停，致死原因主要为脑干脑炎及神经源性肺水肿。此病传染性强、传播速度快，故短时间内可在农村、城镇社区、学校、幼儿园等人口密集地区引起大流行。目前，我国卫生部已将HFMD纳入丙类传染病管理[2]。笔者对惠州市2010年4月～2010年11月共1 166例手足口病患者病毒核酸检测结果进行分析，现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料：选取2010年4月～2010年11月在惠州市中心人民医院感染科住院和留察手足口病患者共1 166例，均为肠道病毒核酸检测阳性患者，临床表现均符合HFMD诊疗指南(2010年版)的诊断标准。
1.2 方法：①标本采集：入院后采集手足口病患者肛拭子及咽拭子标本1 166例，置于－20℃冰箱保存待检；②试剂和方法：检测试剂采用中山大学达安基因公司制备的荧光法专用核酸检测试剂盒。严格按照试剂盒说明书操作进行病毒RNA抽提，设计引物，应用abi7500荧光定量PCR仪进行荧光定量PCR检测。
1.3 统计学分析：采用SPSS 13.0统计软件进行数据处理，应用χ2检验分析多个总体率或构成比之间差异有无统计学意义。
2 结果
1 166例肠道病毒荧光定量PCR检测结果：见表1。其中埃可病毒通用型（EV）、EV71双阳性399例，EV、Cox A16双阳性60例，EV71、Cox A16双阳性2例。经统计分析，1 166例患者中以埃可病毒属感染为主，EV71明显多于Cox A16，P＜0.005；在Cox A16阳性病例中多有EV协同感染，均有统计学意义。
表1 1 166例肠道病毒荧光定量PCR检测结果
肠道病毒阳性（例）阴性（例）合计（例）阳性率（%）埃可病毒通用型7763901 16666.6EV715436231 16646.6Cox A16751 0911 1666.43 讨论
本研究结果显示1 166例手足口病患者中以EV、EV71型占绝大多数，说明患者中以埃可病毒属感染为主，可能存在EV型及非EV71亚型协同感染；Cox A16仅占少数比例，此结果与近年来研究结果相符合，同时发现Cox A16多与肠道埃可病毒协同感染。
1985年以前Cox A16被认为是该病的惟一病原体，但最近的研究结果显示EV71在HFMD的病原学中占有越来越重要的地位。自1969年首次分离到EV71以来，人们逐渐认识到EV71病毒是重症手足口病的主要病原体。自1974年Schmidt等首次报道以来，全世界很多国家和地区先后报道了EV71的感染和流行情况，其中有3次大流行：1975年保加利亚、1997年马来西亚和1998年我国台湾地区[3-5]。1998年台湾地区EV71大爆发，共发生129 106例HFMD，其中405例为严重的中枢神经系统感染，78例死亡，死亡原因主要为由中枢神经系统感染而导致的神经源性肺水肿和肺出血（占83%）[6]。近年来我国安徽阜阳地区发生的部分由71型肠道病毒感染引起的症状较严重，甚至出现少数患儿因中枢神经系统、循环系统、呼吸系统损害而导致死亡，引起社会广泛关注及重视[7]。通常情况下，Cox A16引起的疾病预后相对较好，多为散发，极少导致手足口病的大规模暴发；而EV71型肠病毒则较凶险，除了引起手足口病以外，EV71较 Cox A16所致手足口病有更多机会可引起严重中枢神经系统并发症，如无菌性脑膜炎、脑干脑炎、脊髓灰质炎样麻痹、古兰—巴雷综合症、心肌炎或急性呼吸系统感染等。因此，在今后临床中应注重埃可病毒感染手足口病患者的防治工作，尤其是EV71型患者，收治重点为早发现、早治疗，避免危重症的发生。
4 参考文献
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[3] Schmidt NJ,Lennette EH,Ho apparentlt new enterovirus isolated from patients with disease of the central nervous system[J].Infect Dis,2004,23(3):304.
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[6] ZHANG Xin.70 cases of foot and mouth disease pathogen detection and clinical analysis[J].Journal of Preventive Medicine,2009,43(10):1970.
[7] 田 玲,汪 楠,张宏梁,等.手足口病(EV71)防治[J].首都医科大学学报,2008,29(2):253.
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