【关键词】 bcl2;bcl6;cd10;弥漫性大b细胞淋巴瘤 ;免疫组织化学
expression of bcl2,bcl6,cd10 protein and their significance in subgroups of diffuse large bcell lymphoma
chen yu1, zhao tong2,cai qingfa3, wu bingxu1,chen meiyan1
ment of pathology, the 95th military hospital, putian 351100,china;ment of pathology,nanfang medical university;3. department of pathology,affiliated hospital of putian universityabstract:objective to investigate the expression of bcl2,bcl6,cd10 protein and their significance in subgroups of diffuse large bcell lymphoma. methods immunohistochemistry technique (sp method) was used to assess the expression levels of bcl2,bcl6,cd10 protein in 60 cases of diffuse large bcell lymphoma. results expression of bcl2,bcl6 and cd10 protein was found in 33/60(55.0%),29/60(48.3%),28/60(46.7%) cases, respectively. the cd10/bcl6 patterns were as follows: cd10(+)/bcl6(+) 15 cases,25%;cd10(+)/bcl6(-)13 cases,21.7%; cd10(-)/bcl6(+)14 cases,23.3%;cd10(-)/bcl6(-)18 cases,30%。ression levels of the bcl2 protein in cd10(+)/bcl6(+) pattern was higher than that in cd10(-)/bcl6(-)pattern (p=0.037).conclusion the bcl2 protein may be of value to distinct subgroups of diffuse large bcell lymphoma.
key words:bcl2;bcl6;cd10;diffuse large bcell lymphoma;immunohistochemistry
弥漫性大b细胞淋巴瘤(diffuse large bcell lymphoma,dlbcl)是成人最常见的、高度恶性的非霍奇金淋巴瘤(nonhodgkin's lymphomas,nhl),约占成人nhl的40%[13],尽管who将其列为一种独立的疾病类型,但它实际上是一类异质性的淋巴瘤,应用传统的chop(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、泼尼松)方案治疗发现仅有一半左右的患者可获得缓解[2],另一半患者要么治疗无效,要么治疗缓解后复发,最后都导致死亡。对于这一部分的患者,寻找有效的指标来指导治疗是非常重要的。近年来国外一些学者[48]研究发现利用生发中心标志物表达的差异可对dlbcl进行亚分类,另一些学者[912]发现细胞凋亡调控基因在dlbcl分类中也具有重要作用。我们应用免疫组织化学方法检测cd10、bcl6、bcl2在dlbcl中的表达,并对其表达情况及临床意义进行探讨。
1 材料与方法
1.1 材料
收集本院、莆田学院附属第一医院病理科2003年1月~2006年12月诊断明确病例资料齐全的dlbcl 60例,所有病例均为中性福尔马林固定,常规石蜡切片,he染色。由两位以上从事淋巴瘤研究的专家重新阅读,按照2001年who关于淋巴造血系统肿瘤分类标准重新分类。
1.2 方法
采用石蜡切片链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶连接法(sp)免疫组织化学染色,进行生发中心标志物(cd10、bcl6)、凋亡抑制基因bcl2的检测,所用抗体来源、克隆号、工作浓度见表1。免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。抗原修复液为ph9.0的乙二胺四乙酸(edta),cd20用0.01mol/l的枸橼酸缓冲液(ph6.0)。用pbs代替一抗作阴性对照,以扁桃体组织作阳性对照。dab显色,苏木素衬染。cd10/bcl6作为生发中心样分类的依据。
1.3 结果判定
阳性结果判断标准: cd20、cd10 阳性定位于细胞膜, bcl6阳性定位于细胞核,bcl2阳性主要位于细胞质,以>20%的肿瘤细胞染色判为阳性。
1.4 统计学方法
采用spss10.0统计分析软件进行χ2检验,p<0.05有差异有统计学意义。
表1 抗体名称、来源及工作浓度
tab 1 immunohistochemical study:
antibodies and conditions of use
antibodyclonesoursedilutioncd20l26maxim1∶20bcl2100/d5maxim1∶1bcl6p1f6neomarker1∶1cd1056c6zymed1∶1
2 结果
2.1 临床及病理结果
60例dlbcl患者,年龄16~91岁,平均年龄52.9岁。男29例,女31例,男女比例为0.94∶1。累及淋巴结27例(45.0%),单纯累及结外33例(55.0%),主要见于胃肠道、中枢神经系统、颌下腺、睾丸等。参照2001年who关于淋巴造血系统肿瘤分类标准,组织学变型主要是中心母细胞性,占86.7%,见表2。表2 60例dlbcl组织学变型
2.2 蛋白的表达
60例dlbcl中,cd20全部阳性, cd10阳性率46.7% (28/60), bcl6阳性率48.3% (29/60),bcl2阳性率55.0% (33/60)。bcl6/cd10模式为:cd10(+)/bcl6(+) 15例,25%;cd10(+)/bcl6(-)13例,21.7%; cd10(-)/bcl6(+)14例,23.3%;cd10(-)/bcl6(-)18例,30%。
2.3 cd10/bcl6与bcl2表达的相关性
cd10(+)/bcl6(+)15例中,bcl2(+)3例,阳性率20.0%;cd10(-)/bcl6(-)18例中,bcl2(+)10例,阳性率55.6%。两者的表达差异具有统计学意义(χ2=4.332,p<0.05)。cd10(+)28例中,10例表达bcl2,阳性率57.1%;cd10(-)32例中,17例表达bcl2,阳性率53.1%; 两者bcl2表达差异无统计学意义(χ2=0.097,p>0.05)。bcl6(+)27例中,9例表达bcl2,阳性率33.3%; bcl6(-)33例中,25例表达bcl2,阳性率75.8%;两者bcl2的表达差异有统计学意义(χ2=10.884,p<0.05)。
3 讨论
dlbcl是高度侵袭性、异质性的淋巴瘤,在临床表现、形态学特点、免疫表型和遗传学特征等方面都存在明显差异,但若早期诊断、强力化疗,近半数的患者可获得缓解。以往人们常用国际预后指数(ipi)数值的大小判断预后,但临床应用证明大多数dlbcl的ipi数值为中间值[13,14],难以判断预后。2000年以来国外采用cdna微阵列技术[47] 研究发现在基因水平上可以将dlbcl分为三种类型:(1)生发中心样(germinal center bcelllike ,gcb):基因表达特征与正常生发中心b细胞相似;(2)活化b细胞样(activated bcelllike,abc):基因表达特征与活化的外周血b细胞相似;(3)第3型(type 3)。并且发现gcb的预后明显好于abc和type 3,故将dlbcl简单分为两型:gcb与nongcb ,前者代表预后较好的一型,后者则代表预后较差的一型。但cdna微阵列技术要求新鲜或冰冻标本以提取足够的rna, 所使用芯片的价格比较昂贵,临床上难以推广应用。近年来人们把研究的方向转向蛋白水平的表达上,并发现表达cd10、bcl6的患者预后较好。
cd10,急性淋巴母细胞性白血病共同抗原,为膜相关的中性肽链内切酶;在淋巴细胞的分化过程中,它表达于前b细胞和生发中心b细胞,大约75%的前b淋巴母细胞性白血病及大部分滤泡性淋巴瘤均表达cd10,在基因分析中发现cd10的表达与t(14∶18) 染色体异位有关,因此可以作为生发中心细胞的标志物[15]。本组cd10的阳性率为46.7%(28/60),高于国外的报道[11,16],可能与本组病例大部分为中心母细胞性有关。
bcl6,锌指蛋白,为一核内转录因子,属于可调节细胞的增殖、分化及器官的发育、形成的锌指蛋白家族。bcl6基因首先在伴有染色体2q27转位的dlbcl中发现,在成熟b细胞的生发中心内表达,但却未见于不成熟的前体细胞或分化好的浆细胞,它在b细胞的分化和生发中心形成中起重要作用。bcl6基因具有控制炎细胞浸润、淋巴因子表达及生发中心形成的生理作用,可作为一转录因子抑制生发中心b淋巴细胞进一步分化成熟而导致nhl的发生[17],也可作为生发中心细胞的标志物。研究表明cd10和bcl6联合应用能够确定dlbcl的gcb型,是预后好的有效指标[46,15]。本组bcl6阳性率为48.3%(29/60),与文献报道相近。60例dlbcl中,cd10(+)/bcl6(+) 15例(25%),低于bai m(32%)的报道[18]。cd10(-)/bcl6(-)18例(30%),与bai m(31%)的报道相近[18]。但cd10(+)/bcl6(-)或cd10(-)/bcl6(+)的病例占38%,对于这一部分的患者,其预后的判断指标仍需进一步探讨。
大量研究表明细胞凋亡受众多基因调控,bcl2基因是细胞凋亡的重要调节基因,它首先在人体内的b淋巴细胞中发现,是一原癌基因,能抑制细胞凋亡。它们在线粒体参与的凋亡途径中起调控作用,能控制线粒体中细胞色素c等凋亡因子的释放。文献[8,13,19]报道bcl2高表达在dlbcl中较为常见(30%~60%),其中20%~30%病例因bcl2基因易位,即t(14;18)导致bcl2高表达,其余病例因bcl2基因扩增而使bcl2过表达。在dlbcl中,bcl2高表达的患者预后明显差[4,14,20],并与化疗耐药有关[19]。本组bcl2阳性率为55.7%(33/60),与国外大部分研究结果相近[8,13]。其中cd10(+)/bcl6(+)15例中,bcl2阳性率为20%,bcl6(-)/cd10(-)18例中,bcl2阳性率为55.6%,两者表达差异具有统计学意义,说明表达生发中心标志物的病例bcl2低表达,而生发中心标志物不表达的病例bcl2高表达,提示bcl6/cd10与bcl2联合应用可能成为dlbcl亚分类的指标。
本组cd10(+)与cd10(-)的病例,bcl-2表达的差异无统计学意义,但bcl6(+)与 bcl6(-)的病例bcl2表达的差异具有统计学意义,是否提示bcl6(-)的病例可根据bcl2的表达判断预后,bcl6与bcl2的表达是否有一定的相关性,有待进一步研究。
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