原发性干燥综合征（primary Sjgren syndrome，pSS）是一种由淋巴细胞介导的主要累及外分泌腺的全身性自身免疫病。近年研究发现，pSS与肿瘤关系密切，尤其非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）多见，文献报道其发生淋巴瘤概率较常人高出44倍，以弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse-large B-cell lymphoma，DLBCL）为主[1]。pSS并发NHL的发病机制目前仍不清楚，相关研究[2-4]表明，BCL-6基因重排是DLBCL发生中一个主要转化事件。目前，关于pSS并发NHL中BCL-6基因重排的研究未见报道。本研究拟用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技术在pSS合并NHL患者唇腺组织中行BCL-6基因重排检测，探讨BCL-6基因重排的临床病理意义，以期发现pSS合并淋巴瘤的生物学预测指标，为量化pSS患者恶变潜能并采取早期干预治疗提供理论依据。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选取2010年6月～2012年6月76例在本院住院患者作为研究对象，将其分为4组，A组（pSS并发NHL患者），来自风湿免疫科及肿瘤科，16例，其中男性4例，女性12例，年龄18～69岁，平均（52.7±5.9）岁；B组（pSS未并发NHL患者），来自风湿免疫科，20例，其中男性5例，女性15例，年龄18～70岁，平均（53.5±5.4）岁；C组（NHL未并发pSS患者），来自肿瘤科，20例，其中男性6例，女性14例，年龄18～71岁，平均（51.3±6.9）岁；D组（下唇外伤的健康人群），来自急诊科，20例，其中男性5例，女性15例，年龄18～71岁，平均（53.3±6.1）岁。所有研究对象的唇腺活检标本均由病理科制作，4组患者的年龄、性别比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。 1.2 纳入标准 ①pSS患者诊断符合2002年pSS国际诊断分类标准；⑤医院伦理委员会批准；⑥知情同意。 1.3 排除标准 ①继发因素所致pSS；②应排除以下疾病：类肉瘤病，发病早于pSS的淋巴瘤、艾滋病、乙型或丙型肝炎、原发性纤维肌痛以及其他已知可引起自主神经元病变、干燥性角膜炎或唾液腺肿大的疾病；③未通过医院伦理委员会批准。 1.4 FISH方法 BCL-6基因双色探针（32-191016）购自Vysis公司，操作步骤参见文献[7]。结果分析：未发生BCL-6基因重排的细胞显示有两个橘红色和绿色的融合信号，代表一对BCL-6等位基因；发生BCL-6基因重排的细胞则显示有一个橘红色和绿色的融合信号，另外有一个绿色和一个橘红色分离的信号。 1.5 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件对数据进行处理，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果 4组BCL-6基因重排发生率比较差异有统计学意义（χ2=84.225，P=0.000）；A组BCL-6基因重排发生率显著高于B组（χ2=78.658，P=0.000）和D组（χ2=88.391，P=0.000）；A组与C组BCL-6基因重排发生率比较差异无统计学意义（χ2=2.251，P=0.139）（表1）。 3 讨论 pSS容易并发淋巴瘤是本病的特点之一，发生淋巴瘤患者以DLBCL最常见，约占成人NHL的30%～59%[8]。本课题组前期对628例pSS患者进行了长达12年的随访研究，其中有16例患者并发NHL，发生率为2.55%[9]，而国外文献报道pSS患者并发NHL的发生率为7.5%[10]。目前，为何部分pSS患者病程极长而没有发展至淋巴瘤，而部分pSS患者却极快发展为淋巴瘤一直困扰着临床医生。 已有研究表明，NHL的发生是由于单个细胞中发生多基因病变的进行性累积而成，最常见的基因改变类型是染色体易位，可见于>90%的NHL中，染色体易位导致一些癌基因发生重排，在NHL的发病机制上可能起重要作用[11]。Hans等[12]在进行淋巴瘤分子分类的研究时发现，位于人类染色体的3q27的BCL-6基因异常与DLBCL发生及预后关系密切。Tibiletti等[13]的研究亦发现，BCL-6基因断裂重排是NHL最常见、特征性的染色体改变，主要存在于B细胞性NHL中的DLBCL和滤泡性淋巴瘤（FL）中，其重排的发生率分别占30%～40%和6%～14%，由此可见，BCL-6是与NHL特别是与DLBCL和FL关系密切的基因。 本研究利用FISH技术对4组研究对象唇腺组织BCL-6基因的重排情况进行检测，结果发现，16例pSS合并NHL患者唇腺组织BCL-6基因重排发生率为56.2%（9/16），显著高于pSS未并发NHL（20.0%）及健康人群（5.0%），差异有统计学意义。在NHL未并发pSS组中BCL-6基因重排的发生率为50.0%（10/20），与pSS合并NHL组患者比较差异无统计学意义，这提示BCL-6基因重排与pSS并发NHL高度相关。国内同类研究表明，约60%的DLBCL病例有BCL-6基因重排，且其中的大多数均可见BCL-6蛋白过表达，提示BCL-6基因重排导致的BCL-6蛋白表达上调参与了部分DLBCL的发病过程[14]。研究发现，BCL-6蛋白在pSS合并NHL患者中的阳性率高达81.8%，显著高于健康对照组和pSS患者[15]，与本研究结果相符。 总之，研究BCL-6基因的异常对NHL发生发展分子机制的认识、临床预后的判断以及治疗的监控等都具有重要的价值。BCL-6基因重排与pSS患者并发NHL密切相关，BCL-6基因重排可作为预测pSS并发NHL的生物学参考指标之一。由于本研究仅是对pSS并发NHL患者唇腺组织BCL-6基因的重排进行单中心的初步探讨，病例样本量少，尚需开展多中心、大样本、前瞻性临床研究来进一步验证。 [参考文献] .Blood，2008，111（8）：4029-4038. [2] Youinou P，Saraux A，Pers JO.B-Lymphocytes govern the pathogenesis of Sjgren′s syndrome[J].Curr Pharm Biotechnol，2012，13（10）：2071-2077. [3] Dent AL，Shaffer AL，Yu X，et l of inflammation，cytokine expression，and germinal center formation by BCL-6[J].Science，1997，276（5312）：589-592. .Cancer Genet Cytogenet，2001，129（1）：1-9. [5] 赵岩，贾宁，魏丽，等.原发性干燥综合症2002年国际分类（诊断）标准的临床验证[J].中华风湿病学杂志，2003，7（9）：537. .Lyon：IARC Press，2001：171-181. [7] 王桂秋，文亦磊，王华，等.荧光原位杂交技术在淋巴瘤诊断中的应用[J].广西医科大学学报，2008，25（6）：939-940. [8] Voulgarelis M，Skopouli al，immunologic，and molecular factors predicting lymphoma development in Sjgren′s syndrome patients[J].Clin Rev Allergy Immunol，2007，32（3）：265-274. [9] 杨敏，莫汉有，李宝贞，等.原发性干燥综合征合并非霍奇金淋巴瘤16例临床特征分析[J].重庆医学，2012，41（30）：3149-3151. [10] Baimpa E，Dahabreh IJ，Voulgarelis M，et logic manifestations and predictors of lymphoma development in primary Sjgren′s syndrome：clinical and pathophysiologic aspects[J].Medicine，2009，88（5）：284-293. .J Clin Oncol，2006，24（6）：995-1007. .Blood，2004，103（1）：275-282. .Hum Pathol，2009，40（5）：645-652. [14] 徐方平，刘艳辉，骆新兰，等.弥漫性大B细胞淋巴瘤各分子亚型中的bcl-6基因重排与蛋白表达的临床意义[J].中华病理学杂志，2008，37（6）：371-376. [15] 莫汉有，周润华，王晓桃，等.干燥综合征患者唇腺p53、bcl-6及PCNA表达与其发生非霍奇金淋巴瘤的相关性研究[J].重庆医学，2006，35（21）：1954-1956.
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