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葡萄糖6磷酸脱氢酶测定值,葡萄糖6-磷酸脱氢酶测定是查什么

2024-06-05  本文已影响 130人 
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摘 要:目的:探讨检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)酶活的可靠方法。方法:选取190例临床标本为检测标本,分别采用定量比值法、NBT定量法和酶活测定法检测G6PD酶活,比较三种方法测定结果。结果:使用三种不同的方法检测G6PD缺乏型,总检出率分别为5.26%、5.26%和5.78%。其中,男性人群中G6PD缺乏检出率为6.93%,女性人群检出率为3.37%。结论:NBT定量法具有简便快捷,同时准确性高等优点,可对高发地区进行G6PD缺乏症的大规模筛查。

关键词:G6PD;定量比值法;NBT定量法;酶活测定法 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphate dehydrogenase,简称为G6PD)是催化磷酸戊糖途径第一步反应的关键酶,催化6-磷酸葡萄糖脱氢,生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,参与了维持细胞内谷胱甘肽的还原性[1]。由G6PD活性降低所引起的G6PD缺乏症(简称G6PD缺乏症)是世界上最常见的单基因遗传病之一,属于X-连锁不完全显性遗传。全世界约有4亿多人罹患此病,临床上主要表现为慢性非球形细胞溶血性贫血、蚕豆病、新生儿黄疸以及食物、药物或感染诱发的溶血性贫血等,其分子基础是G6PD基因突变[2]。G6PD缺乏症导致细胞内的还原力降低,红细胞不能抵抗氧化损伤而遭受破坏,引起溶血性贫血[3]。我国是本病的高发区之一,呈南高北低的分布特点,尤其是广东、广西、海南等地区。目前,测定G6PD酶的方法有:高铁血红蛋白还原试验、G6PD酶活性测定、G6PD荧光斑点试验。为快速获得G6PD酶活的准确信息,采用改良的G6PD定量比值法和G6PD酶活性测定法进行对比试验,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料:选取医院门诊血标本共190例,其中成年男性血标本101例,女性成年血标本89例。

1.2 试剂与方法:血样先用生理盐水洗涤2次。①改良G6PD /6PGD定量比值法采用广州米基科技贸易发展有限公司提供的试剂盒,按照试剂盒说明书操作,分光光度计比色;②G6PD酶活性测定采用世界卫生组织于1967年公布的标准测定方法进行测定;③硝基四氮唑蓝法(NBT法)。

1.3 参考范围:①WHO推荐的Zinkham法,其正常值为(12.1±2.09)IU/gHb;②NBT定量法,其正常值为13.1~30.0 NBT单位;③G6PD /6PGD比值法,其正常值为:G6PD /6PGD≥0.98(新生儿:≥1.09)。

2 结果

2.1 三种方法的检测结果:应用定量比值法、NBT定量法和酶活测定法筛查G6PD缺乏症,三种方法的总检出率分别为5.26%、5.26%和5.78%。定量比值法和NBT定量法呈现高度的一致性。男性人群中定量比值法和NBT定量法检出率均为6.93%,而酶活测定法的检出率偏低,为5.94%。女性人群中定量比值法和NBT定量法检出率均为3.37%,而酶活测定法的检出率为5.61%。详见表1。

表1 三种G6PD测定方法阳性检出率比较

方法

例数

阳性(例)

阳性率(%)

定量比值法

101

89

7

3

6.93

3.37

NBT定量法

101

89

7

3

6.93

3.37

酶活测定法

101

89

6

5

5.94

5.61

2.2 G6PD缺乏症在不同年龄段中的分布情况:在60岁以下人群中,20~30岁中的G6PD缺乏症病例最多,见图1。在所检测的50例60岁以上人群中未发现G6PD缺乏症患者,详见表2。

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图1 不同年龄段人群中G6PD缺乏症的分布情况

表2 G6PD活性同年龄间的关系

方法

例数

阳性(例)

阳性率(%)

<60岁

≥60岁

<60岁

≥60岁

<60岁

≥60岁

定量比值法

140

50

10

0

7.1

0

NBT定量法

140

50

10

0

7.1

0

酶活测定法

140

50

11

0

7.85

0

为确定NBT定量法和酶活测定法的测定值是否有相关性,我们将测定的相关参数进行比较。WHO标准酶活测定法数值OD650, NBT定量法数值OD340, 将两组数据进行相关性测试。结果表明两组数据间形成一定的相关性(y=1.4356 x+0.591,R2=0.508)。

3 讨论

应用三种方法进行G6PD酶活测定,WHO标准酶活测定法的检出率与另外两种方法不一致。WHO标准规定G6PD缺乏症Ⅰ型为酶活基本丧失,Ⅱ型为酶活小于正常值的10%,Ⅲ型为酶活小于正常值的60%。用WHO标准酶活测定法检测出的G6PD缺乏症结果中,有2个病例酶活接近Ⅲ型的阈值。另外有1例血样利用WHO标准酶活测定法测定的酶活高于正常值,而使用定量比值法和NBT定量法都表明该例样品为G6PD缺乏。这可能跟血样本身受药物抑制或三种测定方法的不同操作相关。

G6PD缺乏症的筛查方法有多种,包括高铁血红蛋白还原试验、NBT纸片、荧光斑点法等。高铁血红蛋白还原试验由于检测假阳性过高,被逐渐的弃用。尽管NBT纸片定性法也有过高假阳性的特点,但由于其简便的特点,只需要对阳性样品进行复查即可。本实验采用WHO标准定量酶活测定方法,NBT定量法及G6PD /6PGD比值定量法进行G6PD缺乏症筛查,检出结果基本一致。在酶活换算方面,杜传书等人提出G6PD值=S/H×20.7(U)(S为第一管吸光值;H为血红蛋白吸光值)的计算公式[4]。通过数值比较,WHO标准定量酶活测定方法同NBT定量法数据间的R2值在0.5左右,表明两组数据间有一定的相关性,但这种相关性并不强烈。因此通过不同的方法进行酶活测定,能够近似的进行相互间的换算。在实验操作流程上,NBT定量法较WHO标准定量酶活测定方法更加简便,如果需要快速的测定酶活,NBT定量法可以获得比较满意的效果。

海南省是G6PD缺乏症高发区,黎族人群G6PD缺乏症的携带率6.47%,保亭县黎族人群G6PD缺乏症发生率为7.03%,五指山市黎族人群G6PD缺乏症发生率为9.94%[5-6]。通过大规模的海南新生儿G6PD缺乏症筛查,检出率为3.73%。本实验血样来源于医院门诊,人群包括汉、黎等多族群,利用三种方法测定G6PD酶活,阳性检出率为5.26%~5.78%。该结果略低于黎族筛查获得的结果,并高于新生儿的检出率[7]。本研究结果表明,医院就诊人群中G6PD缺乏症的发生率较高,结果对于提醒临床医生对患者进行G6PD检测及指导临床用药具有重要的意义。

4 参考文献

[1] 杜传书.我国葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷症研究40年回顾和展望[J].中华血液学杂志,2000,21(4):174.

[2] 杜传书.漫谈“蚕豆病”和“葡萄糖-6磷酸脱氢酶缺乏症”[J].新医学,2001,32(11):696.

[3] 周 笑.G6PD缺乏性溶血性贫血83例临床分析[J].广西医学,2007,29(8):1254.

[4] 张 铀,褚嘉佑.应用G6PD/6PGD比值法检测云南省勐腊县6-磷酸脱氢酶缺乏症的基因频率[J].中国优生与遗传杂志,1995,26(1):4.

[5] 黄慈丹,王 洁,赵振东,等.海南省新生儿G6PD缺乏症筛查结果分析[J].中国热带医学,2007,7(11):2145.

[6] 王 政,江 渊,蔡 苗.海南省保亭县、五指山市黎族G6PD缺乏症调查[J].海南医学,2006,17(12):121.

[7] 余小燕,余 相,张丽科.新生儿脐血地贫筛查和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的分析[J].国际医药卫生导报,2010,16(18):2229.

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