作者：吴玉强， 邓家刚，王志萍，冯旭
【摘要】 目的 优选达肝清颗粒最佳的提取工艺。方法采用正交实验法，以人参皂苷rg1含量及干膏率作为评价指标，筛选最佳的提取工艺。结果达肝清颗粒最佳提取工艺为：药材加10倍量水提取2次，1 h/次，第1次提取前先将药材浸泡1 h。结论优选出的达肝清颗粒的提取工艺稳定合理可行。
【关键词】 达肝清颗粒； 提取工艺； 正交设计； 人参皂苷rg1
病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的常见传染病，我国病毒性肝炎发病数位居法定管理传染病的第一位，仅慢性乙型肝炎病毒携带者就达1.3亿［1］。慢性乙型肝炎病程迁延，如得不到及时的治疗，将会发展为肝硬化甚至肝癌，严重危害人类健康［2］。达肝清颗粒原方系长期用于临床实践的经验方——达肝清汤剂。其由广西特色药材绞股蓝、三姐妹、黄根等7味药组成,具有清热解毒、益气健脾、利湿等功效。现代药理研究表明达肝清有保肝降酶、抗乙肝病毒、提高免疫功能［3］、抗肝纤维化［4］的作用。为了将达肝清汤剂更好地应用于临床上，广西中医学院研究开发出服用、携带方便的达肝清颗粒剂，并对其制备工艺进行了研究。现报道如下。
1 仪器和材料
1.1 仪器与设备
re-52a旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）； agilent1100（dad、vwd）高效液相色谱仪； hb43水分测定仪（梅特勒-托利多中国地区）。
1.2 材料
绞股蓝、三姐妹（三叶香茶菜）、黄根等多味药材均购自南宁市日益旺中草药材经营部，经鉴定为正品。人参皂苷rg1标准品购自中国药品生物制品检定所（批号：110703-200322）。
2 方法与结果
2.1 考察指标的确定
达肝清颗粒处方中有多味药材，有效成分众多，因此以干膏率作为考察指标之一较全面合理，君药绞股蓝的主要有效成分为人参皂苷rg1，故将人参皂苷rg1作为考察指标。
2.2 考察指标的测定方法
2.2.1 干膏率的测定方法
按处方比例称取黄根、三姐妹等药材适量，共9份，根据l9(34)正交实验设计表，将药材浸泡适当时间后提取。提取完毕后浓缩到密度1.05 g/ml(60～70℃)，醇沉(水提液∶95%乙醇=1∶2，醇沉24 h)，弃去沉淀，得醇沉液，测量其体积，备用。将不同条件下的水提液分别浓缩至相对密度为1.20（65℃），称重。称取2 g，分别置于已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，并于105℃干燥至恒重，取出，置于干燥器中放置30 min，迅速精密称定干膏重量。
干膏率（%）=干膏重×浓缩液总重取样量×生药总量×100%
2.2.2 人参皂苷rg1的测定方法
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水（20∶80）为流动相；检测波长为203 nm。柱温为35℃，流速为1 ml/min，理论塔板数按绿原酸峰计应不低于4 000。
对照品溶液的配制：精密称取人参皂苷rg1适量，加甲醇溶解，制成每毫升含人参皂苷rg1 2.03 mg的溶液，即得。
供试品溶液的配制：精密量取50 ml醇沉液放入蒸发皿中，水浴蒸干，加30 ml水溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，30 ml/次，合并萃取液，再用氨试液(氨水∶水=1∶1.5)洗两次，40 ml/次，蒸干正丁醇，加适量甲醇溶解，将甲醇液移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。取部分溶液离心20 min（12 000 r/min），即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪测定其峰面积，计算人参皂苷rg1含量。
2.3 正交实验法优选提取工艺
2.3.1 实验设计
选择对提取效果有重要影响的3个因素（加水量、提取时间、提取次数）作为考察因素，每个因素选取3个水平，编制4因素3水平表。见表1。表1 水提工艺因素水平（略）
2.3.2 正交实验安排及结果
按处方的一定比例称取药材，根据l9(34)正交表安排，分别以干膏率、人参皂苷rg1含量为考察指标进行试验。结果见表2～4。液相图见图1～2。表2 l9(34)正交实验安排和结果，表3 方差分析（以干膏率为考核指标），表4 方差分析（以人参皂苷rg1为考核指标）（略）。
从以上方差分析结果可以看出：以干膏率为评价指标时，a，b因素有显著性影响，影响因素顺序为：b> a > c，且a2，b2，c3最佳，所以最佳工艺为a2b2c3；以人参皂苷rg1为评价指标时，b因素有显著性影响，影响因素顺序为：b>a>c；且a2，b2，c3最佳，所以最佳工艺为a2b2c3。综合比较上述结果，由于c因素各水平间的差异不显著，从实际生产节约时间和节约能源考虑，b因素选第2水平，a因素选第2水平， c因素选第2水平，即a2b2c2。即加10倍量水提取2次，1 h/次，第1次提取前先将药材浸泡1 h。
2.4 最佳提取工艺验证
为了进一步验证正交试验结果的准确性，以确保提取工艺合理可行，按上述工艺条件a2b2c2，重复安排3批试验。结果见表5。表5 水提工艺验证结果（略）
3 讨论
采用正交设计，确定了水提工艺的最佳条件，即：即称取水提取部分药材，加入药材量10倍体积的水，加热提取两次，1 h/次。其中第1次提取前先将药材浸泡1 h。验证试验结果表明提取工艺稳定。
【参考文献】
［1］崔玉, 詹林盛. 乙型肝炎病毒动物模型研究进展［j］. 生物技术通讯, 2007, 18(2):307.
［2］中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会. 病毒性肝炎防治方案［j］. 中华传染病杂志,2001,9(1):56.
［3］邓家刚, 覃文慧, 涂燕云，等. “达肝清”抗乙肝病毒、降酶及调节免疫功能临床观察［j］. 广西中医药, 2007, 30(1):13.
［4］邓家刚, 郑作文, 王勤，等. 达肝清对四氯化碳所致大鼠慢性肝损伤的保护作用［j］.中药药理与临床, 2007, 23(2):54.
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