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达肝清颗粒提取工艺的研究

2022-11-06  本文已影响 417人 
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作者:吴玉强, 邓家刚,王志萍,冯旭

【摘要】   目的 优选达肝清颗粒最佳的提取工艺。方法采用正交实验法,以人参皂苷rg1含量及干膏率作为评价指标,筛选最佳的提取工艺。结果达肝清颗粒最佳提取工艺为:药材加10倍量水提取2次,1 h/次,第1次提取前先将药材浸泡1 h。结论优选出的达肝清颗粒的提取工艺稳定合理可行。

【关键词】 达肝清颗粒; 提取工艺; 正交设计; 人参皂苷rg1

  病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的常见传染病,我国病毒性肝炎发病数位居法定管理传染病的第一位,仅慢性乙型肝炎病毒携带者就达1.3亿[1]。慢性乙型肝炎病程迁延,如得不到及时的治疗,将会发展为肝硬化甚至肝癌,严重危害人类健康[2]。达肝清颗粒原方系长期用于临床实践的经验方——达肝清汤剂。其由广西特色药材绞股蓝、三姐妹、黄根等7味药组成,具有清热解毒、益气健脾、利湿等功效。现代药理研究表明达肝清有保肝降酶、抗乙肝病毒、提高免疫功能[3]、抗肝纤维化[4]的作用。为了将达肝清汤剂更好地应用于临床上,广西中医学院研究开发出服用、携带方便的达肝清颗粒剂,并对其制备工艺进行了研究。现报道如下。

  1 仪器和材料

  1.1 仪器与设备

  re-52a旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂); agilent1100(dad、vwd)高效液相色谱仪; hb43水分测定仪(梅特勒-托利多中国地区)。

  1.2 材料

  绞股蓝、三姐妹(三叶香茶菜)、黄根等多味药材均购自南宁市日益旺中草药材经营部,经鉴定为正品。人参皂苷rg1标准品购自中国药品生物制品检定所(批号:110703-200322)。

  2 方法与结果

  2.1 考察指标的确定

  达肝清颗粒处方中有多味药材,有效成分众多,因此以干膏率作为考察指标之一较全面合理,君药绞股蓝的主要有效成分为人参皂苷rg1,故将人参皂苷rg1作为考察指标。

  2.2 考察指标的测定方法

  2.2.1 干膏率的测定方法

  按处方比例称取黄根、三姐妹等药材适量,共9份,根据l9(34)正交实验设计表,将药材浸泡适当时间后提取。提取完毕后浓缩到密度1.05 g/ml(60~70℃),醇沉(水提液∶95%乙醇=1∶2,醇沉24 h),弃去沉淀,得醇沉液,测量其体积,备用。将不同条件下的水提液分别浓缩至相对密度为1.20(65℃),称重。称取2 g,分别置于已恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,并于105℃干燥至恒重,取出,置于干燥器中放置30 min,迅速精密称定干膏重量。

  干膏率(%)=干膏重×浓缩液总重取样量×生药总量×100%

  2.2.2 人参皂苷rg1的测定方法

  色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈-水(20∶80)为流动相;检测波长为203 nm。柱温为35℃,流速为1 ml/min,理论塔板数按绿原酸峰计应不低于4 000。

  对照品溶液的配制:精密称取人参皂苷rg1适量,加甲醇溶解,制成每毫升含人参皂苷rg1 2.03 mg的溶液,即得。

  供试品溶液的配制:精密量取50 ml醇沉液放入蒸发皿中,水浴蒸干,加30 ml水溶解,用水饱和正丁醇萃取3次,30 ml/次,合并萃取液,再用氨试液(氨水∶水=1∶1.5)洗两次,40 ml/次,蒸干正丁醇,加适量甲醇溶解,将甲醇液移至10ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。取部分溶液离心20 min(12 000 r/min),即得。

  测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl,注入液相色谱仪测定其峰面积,计算人参皂苷rg1含量。

  2.3 正交实验法优选提取工艺

  2.3.1 实验设计

  选择对提取效果有重要影响的3个因素(加水量、提取时间、提取次数)作为考察因素,每个因素选取3个水平,编制4因素3水平表。见表1。表1 水提工艺因素水平(略)

  2.3.2 正交实验安排及结果

  按处方的一定比例称取药材,根据l9(34)正交表安排,分别以干膏率、人参皂苷rg1含量为考察指标进行试验。结果见表2~4。液相图见图1~2。表2 l9(34)正交实验安排和结果,表3 方差分析(以干膏率为考核指标),表4 方差分析(以人参皂苷rg1为考核指标)(略)。

  从以上方差分析结果可以看出:以干膏率为评价指标时,a,b因素有显著性影响,影响因素顺序为:b> a > c,且a2,b2,c3最佳,所以最佳工艺为a2b2c3;以人参皂苷rg1为评价指标时,b因素有显著性影响,影响因素顺序为:b>a>c;且a2,b2,c3最佳,所以最佳工艺为a2b2c3。综合比较上述结果,由于c因素各水平间的差异不显著,从实际生产节约时间和节约能源考虑,b因素选第2水平,a因素选第2水平, c因素选第2水平,即a2b2c2。即加10倍量水提取2次,1 h/次,第1次提取前先将药材浸泡1 h。

  2.4 最佳提取工艺验证

  为了进一步验证正交试验结果的准确性,以确保提取工艺合理可行,按上述工艺条件a2b2c2,重复安排3批试验。结果见表5。表5 水提工艺验证结果(略)

  3 讨论

  采用正交设计,确定了水提工艺的最佳条件,即:即称取水提取部分药材,加入药材量10倍体积的水,加热提取两次,1 h/次。其中第1次提取前先将药材浸泡1 h。验证试验结果表明提取工艺稳定。

【参考文献】
  [1]崔玉, 詹林盛. 乙型肝炎病毒动物模型研究进展[j]. 生物技术通讯, 2007, 18(2):307.

  [2]中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会. 病毒性肝炎防治方案[j]. 中华传染病杂志,2001,9(1):56.

  [3]邓家刚, 覃文慧, 涂燕云,等. “达肝清”抗乙肝病毒、降酶及调节免疫功能临床观察[j]. 广西中医药, 2007, 30(1):13.

  [4]邓家刚, 郑作文, 王勤,等. 达肝清对四氯化碳所致大鼠慢性肝损伤的保护作用[j].中药药理与临床, 2007, 23(2):54.

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