作者：王麟，刘静毅，袁珂，张虹
【摘要】 目的优选姜炙厚朴的最佳闷润条件。方法采用高效液相色谱（hplc）法，以厚朴酚与和厚朴酚的含量为考察指标优选姜炙的最佳闷润条件。结果姜炙厚朴的最佳闷润条件为：生姜用量10％，姜汁体积与药材的用量比为60 l/100 kg，闷润时间60 min。结论该工艺条件为制定厚朴饮片合理的加工工艺及质量标准提供了参考依据。
【关键词】 姜炙法； 闷润； 厚朴酚； 和厚朴酚； 高效液相色谱法
厚朴为木兰科植物厚朴magnolia officinais wils.或凹叶厚朴magnolia officinalis rehd. et wils. var. biloba rehd. et wils. 的干燥干皮、根皮及枝皮［1］。载于《神农本草经》，又名厚皮、川朴、紫油厚朴。性温，味苦、辛，具有抗菌、消炎、抗胃溃疡、抗氧化等作用［2］，对人的咽喉有一定的刺激作用，故内服一般不生用，姜制后可消除对咽喉的刺激性，同时可增强宽中和胃的作用。厚朴中的主要成分厚朴酚与和厚朴酚为联苯型木脂素类［3］，以游离态与植物胶、树脂等脂溶性成分共存。姜制厚朴的炮制方法目前应用的主要有姜炙法和生姜汁煮法［1，4～5］。姜炙法中只规定了生姜的用量，而未确定姜汁的体积和闷润时间。故笔者对厚朴姜制过程中的闷润条件进行了工艺优化研究。
1 材料
1.1 仪器与试剂
waters 2996 pda检测器，mettler 十万分之一分析天平，mettler 万分之一分析天平，millipore超纯水仪，舒美kq2200de数控超声仪,auto science溶剂过滤装置，森信 dgg－9240a型干燥箱。色谱纯甲醇（天津四友公司）、娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。
1.2 对照品及药材
厚朴酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110729-200310）；和厚朴酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110730-200307）。厚朴药材于2007-05采自浙江龙泉，经浙江林学院林业与生物技术学院遗传学科斯金平教授鉴定为厚朴magnolia officinalis wils.。
2 方法与结果
2.1 姜汁用量考察为了考察出药材润透时的吸水量，需要进行姜汁用量考察。取厚朴丝3份，每份约10 g，精密称定，加适量清水闷润至透，再次精密称定，计算两次重量差异，即得药材润透时的吸水量。结果见表1。表1 吸水量考察结果（略）
为了达到闷润至透的标准，生姜用量固定为10%时，姜汁的体积与药材的用量比（即姜汁用量）应为62.9587/100≈60%，为60 l/100 kg药材。
2.2 闷润时间考察
2.2.1 姜汁的制备取生姜60 g，洗净切碎，捣烂，加适量水，压榨取汁，残渣加水共捣，压榨取汁，如此反复2次，合并姜汁，加水至360 ml，备用。
2.2.2 不同闷润时间姜炙厚朴的制备取厚朴丝，每份40 g，加姜汁24 ml，分别闷润30，40，50，60，70 min，观察闷润的程度，之后120℃炒16 min，取出，置烘箱中55℃烘4 h。取出，打粉，过筛，备用。不同的闷润时间条件下平行制备3批样品。
2.3 色谱条件色谱柱为waters xbridge ods c18柱；流动相为meoh∶h2o（78∶22）；柱温25℃；检测波长294 nm；流速1 ml · min-1。
2.4 含量测定方法的建立
2.4.1 对照品溶液的制备精密称定厚朴酚对照品2.60 mg、和厚朴酚对照品0.97 mg，分别置25 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，过0.45 μm微孔滤膜，即得。
2.4.2 供试品溶液的制备取由不同闷润时间得到的姜炙厚朴样品粉末（过3号筛）约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，摇匀，密塞，浸渍24 h，滤过。精密量取续滤液5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
2.4.3 标准曲线的绘制取厚朴酚对照品溶液2，5，10，15，20 μl，和厚朴酚对照品溶液1，2，5，10，20 μl分别注入高效液相色谱仪中，按上述色谱条件测定。以峰面积积分值为纵坐标，对照品含量为横坐标绘制标准曲线。计算厚朴酚与和厚朴酚的回归方程分别为：y=1.68×106 x-1.19×104，r=0.999 999； y=1.73×106x-4×103，r=0.999 984。结果表明厚朴酚在0.092 8～0.928 μg范围内，和厚朴酚在0.020 4～0.408 μg范围内线性关系良好。
2.4.4 精密度实验取对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪中，连续进样5次，测定峰面积积分值，计算厚朴酚与和厚朴酚的rsd分别为0.62%和0.59%。表明厚朴酚与和厚朴酚精密度良好。
2.4.5 稳定性实验分别在0, 2, 4, 6, 8, 10 ,12 h进同一供试品溶液10 μl，测定峰面积积分值，计算厚朴酚与和厚朴酚的rsd分别为0.84%和0.79%。表明厚朴酚与和厚朴酚在12 h内稳定性良好。
2.4.6 重复性实验取同一样品粗粉5份，每份约0.2 g，精密称定，按照上述供试品溶液的制备方法制备。取供试品溶液10 μl注入高效液相色谱仪，测定厚朴酚与和厚朴酚峰面积积分值, 计算rsd分别为1.93%和1.39%。
2.4.7 加样回收率实验取已知含量的姜炙厚朴炮制品粉末约0.1 g，精密称定，分别加入厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备。取供试液10 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，计算厚朴酚与和厚朴酚的回收率分别为99.081%和98.875% ，rsd分别为1.98%和1.69%。
2.4.8 不同闷润时间姜炙厚朴中厚朴酚与和厚朴酚的含量测定依次进各供试品溶液10 μl于高效液相色谱仪中，按照前述色谱条件测定峰面积积分值，计算各供试品溶液中厚朴酚与和厚朴酚的含量。结果见表2。对照品和样品色谱图见图1～4；不同闷润时间姜炙厚朴总酚含量变化趋势见图5。表2 不同闷润时间总酚含量测定结果（略）
3 讨论
在《中国药典》2005版、浙江省炮制规范及相关文献的检索中发现姜炙厚朴在加姜汁闷润时姜汁的体积均未见明确的规定或报道，而炮制上有“七分润工，三分刀工”的说法，说明闷润是影响饮片质量的一个重要环节。加水不足不能达到闷润至透的标准，加水过多又易造成成分的流失等，闷润时间过短不能达到姜制的目的，时间过长则造成生产效率的低下，故笔者以“闷润至透”为标准，考察了厚朴在刚刚润透时的吸水量，又以总酚含量为标准考察了不同闷润时间对总酚含量的影响，找出了姜炙厚朴闷润的优化方法。
在对厚朴药材吸水量的考察结果分析时发现，厚朴药材刚好闷润至透时吸水量约占药材干重的60％左右，故确定姜炙厚朴中在生姜的用量固定为10%的情况下，姜汁的体积与药材的用量比应为60 l/100 kg。
在对闷润时间考察结果分析时发现，依据总酚含量的测定结果，发现在30 min的闷润时间下，姜炙厚朴中的总酚含量最高，随着闷润时间的增长，总酚含量有不同程度降低的趋势，但在60 min水平下总酚含量又较高。在对不同闷润时间样品的感观检查中发现在30 min和40 min的闷润时间下，药材没有将姜汁吸尽，且内部仍为干燥状态，不能达到“闷润至透的标准”，其他三个闷润时间下药材均已润透，综合两方面考虑后确定闷润时间60 min较为合适。
以上实验结果表明，闷润至透的最佳工艺是：生姜用量10%，姜汁的体积与药材的用量比应为60%，即60 l/100 kg，闷润60 min。在此条件下将闷润后的厚朴进一步炒制、烘干，所得姜制厚朴炮制品中有效成分厚朴酚与和厚朴酚的含量（总酚含量）相对较高。
【参考文献】
［1］国家药典委员会. 中国药典，ⅰ部［s］.北京：化学工业出版社，2005:205，196.
［2］李杰萍, 梁 统, 周克元, 等. 厚朴酚对趋化三肽激活的大鼠中性粒细胞功能的影响［j］. 中国药科大学学报, 2003, 34(3) : 260.
［3］黄文华, 郭宝林, 斯金平. 不同种源厚朴酚性成分的hplc图谱研究［j］. 中国中药杂志,2005,30(13): 968.
［4］欧阳荣,周新蓓,胡铁骊, 等. 厚朴生片及5种不同炮制品的质量比较［j］. 中医药导报, 2007, 13(10):19.
［5］叶定江，原思通. 中药炮制学辞典［m］.上海：上海科学技术出版社，2005:469.
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