反转录环介导等温扩增(环介导等温扩增产物的检测方法)

中国论文网为大家解读本文的相关内容： 【摘要】：建立了基于浊度仪和羟基萘酚蓝(Hydroxy naphthol blue,HNB)颜色变化的简单、快速和灵敏的环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)检测方法,应用于中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)的检测。针对MERS-CoV的核衣壳蛋白基因(Nucleocapsid,N)设计6条特异引物,在等温条件下(63℃)进行60min扩增反应。通过实时浊度仪记录扩增曲线和扩增前在反应体系中加入HNB观察颜色变化两种方式进行检测结果判定。本文对不同人类冠状病毒及常见呼吸道病毒进行了特异性验证,对梯度稀释的体外转录MERS-CoV全N基因RNA进行了定量和检测限分析,同时与已发表的实时荧光定量PCR(rRT-PCR)进行比较。结果显示,本研究建立的RT-LAMP方法特异性高,对于每反应管103至106的拷贝数RNA,出峰时间与每反应管N基因RNA拷贝数对数值有稳定的线性关系。基于浊度仪和颜色判定的RT-LAMP检测方法检测限分别为500拷贝和1 000拷贝。因此,该方法有望应用于MERS-CoV感染的快速筛选,具有在基层医疗卫生机构和现场推广和应用的潜力。
【关键词】： 环介导逆转录等温扩增 中东呼吸综合征冠状病毒
【分类号】：R373;R440
【正文快照】：
中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respir-atory syndrome coronavirus,MERS-CoV)感染最早发现于一名60岁的沙特阿拉伯王国吉达市男性。他于2012年6月6日发病,7日后因重症肺炎住院治疗,随后发生急性肾衰竭并于2012年6月24日死亡。2012年10月,van Boheemen等[1]对该患者的痰
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