恶性黑色素瘤的免疫组化解读，恶性黑色素瘤免疫治疗临床试验

今天中国论文网小编为大家分享毕业论文、职称论文、论文查重、论文范文、硕博论文库、论文写作格式等内容. 恶性黑色素瘤急性炎症复合动物模型的建立

作者：刘祎，陈爱霞，邢敬龙，张丹芳，韩 健，马跃美作者单位：1.天津医科大学手术外科学教研室，天津；2.天津市肿瘤医院病理科,天津

【摘要】 目的 建立不同类型的恶性黑色素瘤-急性炎症复合模型，筛选出最佳方案。方法 将25只条件相同的小鼠随机分为创伤肿瘤组（a），持续扩创肿瘤组（b），创伤化脓菌肿瘤组（c），创伤冰乙酸肿瘤组（d），单纯肿瘤组（e），每组5只，先建立肿瘤模型，待肿瘤长到500 mm3建立急性炎症模型，观察炎症状况与肿瘤生长情况。结果 a组与e组小鼠肿瘤生长接近，b，c，d组肿瘤生长接近且慢于e组。结论 急性炎症期的持续是成功建立模型的重要前提。

【关键词】 恶性黑色素瘤；动物模型；急性炎症

the research of malignant melanomaacute inflammation model in mouse

liu yi，chen aixia，xing jinglong，zhang danfang，han jian，ma yuemei （department of operative surgery，tianjin medical university，tianjin 300060，china）

abstract: objective studying various types of malignant melanomaacute inflammation model in mouse to find the best manner. methods 25 mice were divided into five groups by random.（group a,b,c,d were experimental groups；group e was control group）.the mouse melanoma model was made with b16 cell suspending liquid. when the tumor’s volume was about 500 mm3, four kinds of acute inflammation models were built. the condition of wound and the growth of tumor were recorded. results the growth of tumor in group a was similar to the control；the growth of tumor in group b, c, d were almost the same and slower than the control group. conclusion a sustained acute inflammation process was necessary to this model.

keywords: malignant melanoma; animal model；acute inflammation

炎症与肿瘤有着非常密切的联系。恶性黑色素瘤具有很强的侵袭与转移能力［1］，是研究恶性肿瘤的良好模型。本实验通过建立四种恶性黑色素瘤-急性炎症复合动物模型，阐明各自优劣，为研究恶性肿瘤与炎症的关系提供可借鉴的动物模型。

1 材料与方法

1.1 实验动物

c57小鼠购于北京军事医学科学院动物中心，8周龄，雄性25只，体重25～30 g，编号后随机分为创伤肿瘤组（a），持续扩创肿瘤组（b），创伤化脓菌肿瘤组（c），创伤冰乙酸肿瘤组（d），单纯肿瘤组（e），每组5只，交由天津医科大学动物中心洁净饲养。

1.2 实验方法

1.2.1 荷瘤鼠模型 将黑色素瘤细胞株b16复苏，1 640培养基培养1周，0.2%胰酶消化成单细胞悬液，调整细胞密度达到1×107/ml。75%酒精消毒小鼠右鼠蹊部，每只皮下注射0.2 ml细胞悬液。每天观察小鼠生命体征及肿瘤细胞生长情况。10 d后接种部位开始出现皮下肿块，每天测量肿块长径（a）与短径（b），待肿瘤体积（v）达到500 mm3（v=a×b2/2）［2］,建立急性炎症模型。

1.2.2 急性炎症模型 乙醚麻醉小鼠后，右侧背部备皮，做直径约1 cm圆形创口。c组小鼠创口涂抹一层金黄色葡萄球菌悬液（atcc25923）；d组小鼠涂抹一层冰乙酸（天津市瑞金特化学品有限公司）；b组小鼠每日3pm乙醚麻醉后扩创，使创口直径维持在1 cm左右。

1.3 检测方法

每日记录肿瘤生长情况与伤口情况，绘制肿瘤生长曲线。

1.4 统计学处理

应用spss13.0软件进行数据处理，p＜0.05具有统计学意义。

2 结果

2. 1 创口情况

a组：伤口明显收缩，表面干燥。b组：伤口边缘组织较陈旧，中央为新鲜肉芽组织。c组：伤口表面有脓茄。d组：伤口与组织粘连明显。

2.2 肿瘤体积

4个实验组与对照组肿瘤体积随时间推移而出现差异。a组与e组肿瘤生长曲线上升较快且趋于一致，b、c、d三组肿瘤生长曲线上升趋势则慢于a、e两组（图1），急性炎症对肿瘤的生长可能存在抑制作用，不同干扰措施对肿瘤生长的影响可能不同。采用单因素多变量方差分析处理肿瘤体积数据，“时间”及“分组”两项对应p值小于0.05，证实除时间因素外，急性炎症对肿瘤体积的变化有影响（表1）。b、c、d三组两两相比p值均大于0.05，说明三组肿瘤体积无差异；a、e两组相比p值大于0.05，说明二者肿瘤体积无差异；b、c、d分别与a组比较p值均小于0.05，说明b、c、d三组肿瘤体积小于a组；b、c、d分别与与e组比较p值均小于0.05，说明b、c、d三组肿瘤体积小于e组（表2）。统计分析证实不同干扰措施对肿瘤生长的影响不同，模型a对肿瘤的生长基本无影响，模型b、c、d可抑制肿瘤生长且作用效果相同。表1 不同因素对肿瘤生长的影响表2 不同分组肿瘤体积比较p值表

3 讨论

　　炎症与肿瘤的生长、发展、侵袭和转移关系密切。目前大部分研究都着眼于慢性炎症与肿瘤的关系，对急性炎症关注甚少。研究证明慢性炎症可以促进肿瘤的生长［3］，而急性炎症对肿瘤的作用效果与机制尚不明朗。madalena通过在充满粒细胞的空腔中移植b16细胞证实粒细胞可以减缓表皮性黑色素瘤的生长［4］，这提示急性炎症可能抑制肿瘤细胞的生长。粒细胞虽是急性炎症的主要成分，但急性炎症进程中还会产生其他炎症因子与细胞，比如单核细胞，淋巴细胞，而在慢性炎症进程中单核细胞，淋巴细胞及其分泌的细胞因子是促进肿瘤生长的动力之一［57］，所以建立一个稳定可靠的动物模型来研究急性炎症与肿瘤生长的关系是必要的。madalena实验的另一缺陷是肿瘤由充满粒细胞的环境发生发展而来罕见于临床；调查显示临床上大部分肿瘤在发现的时候并非早期［8］，而建立中晚期恶性肿瘤与急性炎症的动物模型未见报道，本实验我们先为小鼠移植b16细胞，待肿瘤体积达到500 mm3后又制造了急性炎症，建立了恶性黑色素瘤-急性炎症的复合模型，不仅弥补了madalena实验的缺陷，也使动物模型更符合临床实际需求。

　　本实验中，在建立急性炎症模型以前，对照组与实验组肿瘤体积集中在450～550 mm3之间，施加不同干扰后，肿瘤生长出现了不同趋势。a组与e组肿瘤生长比较接近，其他实验组肿瘤生长速度趋缓，体积逐渐低于e组。a组只做了一次创口，所产生的炎细胞浓度与作用时效均有限，b，c，d三组则采用不同的方法维持炎症的作用强度，延长作用时效。这说明急性炎症若要发挥维持肿瘤生长的作用应该具备两个条件：①急性炎症反应需要达到一定的强度；②急性炎症进程要持续一定时间。

我们采用维持急性炎症的方法有三种，分别是持续扩创，创伤＋金葡菌，创伤＋冰乙酸。图1中代表b，c，d，三组的肿瘤生长曲线叠加在一起，统计分析证实这三种手段对肿瘤生长的抑制作用没有差异。

综上所述，结合创口的情况，b组小鼠创口处组织成分新老交替，但创面干净，没有异物，适合无菌要求较高实验，但建模操作复杂，需每日麻醉小鼠，对小鼠的生理状况可能有影响；c组小鼠创面有脓茄覆盖，小鼠有罹患败血症的危险，且由于金葡菌感染力强，要求单独饲养，但建模操作简便，炎症持续效果有保障；d组小鼠的创面较c组干净，创口处组织成分较b组均一，但冰乙酸具有腐蚀能力，对实验部位要求严格，建模过程中应避开大中型血管及其他敏感部位。三种建模方式各有优劣，究竟选用何种模型，在保证效果的前提下，应结合实际条件，遵循科学、经济、方便的原则最终确定［9］。

【参考文献】 ［1］ 刘巍峰,牛晓辉.皮肤黑色素瘤的诊断与治疗［j］.中国骨肿瘤骨病,2008,7(3):171-175.［2］ 王登山,沈美玲,卢根福，等.内皮抑素对结肠癌增殖和转移抑制效应的实验观察［j］.临床与实验病理学杂志,2005,20(3):342-346.［3］ mantovani a,allavena p, sica a,et related inflammation［j］.nature, 2008,454 (7203): 436-444.［4］ costa mm，aguas matory granulocytes decrease subcutaneous growth of melanoma in mice［j］. inflammation,2004,8(6):355-357.［5］ hillen f, baeten ci, vandewinkel a,et yte infiltration and tumor cell plasticity are parameters of aggressiveness in primary cutaneous melanoma［j］. cancer immunol immunother,2008, 57(1):97-106.［6］ lin ww，karin m.a cytokinemediated link between innate immunity, inflammation, and cancer［j］. j clin invest, 2007,117(5):1175-1183.［7］ 蒋登金，郭光金，张天飞，等.小肠浆肌膜腔内自体脾组织移植动物模型的建立与意义［j］.局解手术学杂志，2005,14(5):289-291.［8］ 张成琪. petct在妇科恶性肿瘤诊断中的应用［j］.中国实用妇科与产科杂志,2008,24（3）：179-181.［9］ 韩明勇,刘 奇,余捷凯等.血清蛋白质指纹图谱与人工神经网络模型在肺癌诊断中的应用［j］.山东大学学报(医学版),2008,46(6):604-607.（声明：本站文章仅给需要的医务工作者提供交流学习参考。翰林医学论文网免费提供。部分资源由工作人员网上搜索整理而成，如果您发现有哪部分资料侵害了您的版权，请速与我们后台工作人员联系，我们将即时删除。客服qq:88970242.后台工作qq：928333977）

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