作者：刘伟民， 江滨 曾元儿， 陈如端 林萍娟
【摘要】 目的比较决明子总蒽醌的水提和醇提工艺，确定提取决明子总蒽醌的最佳工艺。方法采用正交实验法，分别在水提工艺中考察了浸泡时间、提取时间、提取次数和固液比，在醇提工艺中考察了乙醇浓度、提取温度、提取时间和固液比对决明子总蒽醌提取率的影响。用紫外-可见分光光度法测定总蒽醌的含量。结果总蒽醌的提取量方面醇提效果明显优于水提。在醇提的考察因素中，乙醇浓度、提取时间和固液比对总蒽醌的提取有显著影响(p<0.05)。结论决明子总蒽醌提取的最佳工艺为8倍用量的50%乙醇在80℃下提取2h，提取次数2次。
【关键词】 决明子; 总蒽醌; 正交实验
abstract:objectiveto compare the effect of water extracting and alcohol extracting processes on anthraquinone content in semen cassiae and to optimize the extraction of total anthraquinone of semen schoosing water as the solvent，the permeating time，the extracting time，the extracting frequencies and the amount of solvent were determined by orthogonal test. with different concentrations of alcohol as the solvent，the extracting temperature，the extracting time and the amount of solvent were determined by orthogonal test. the content of total anthraquinone was determined by uv-vis spectrophotometry. resultsalcohol was a better solvent to extract anthraquinone than water. using alcohol as the solvent，the concentration of alcohol，the extracting time and the amount of solvent were significant factors (p<0.05).conclusionthe optimum extraction process is as follows: 80℃，reflux extraction with 8-fold 50% alcohol for 2 times，2h per time.
key words:semen cassiae; total anthraquinone; orthogonal test
决明子，为豆科植物决明cassia obtusifolia l.或小决明cassia tora l.的干燥成熟种子。最早记录在《神农本草经》中，“治青盲，目淫肤赤白膜，眼赤痛泪出，久服益精光”。决明子在药性上甘、苦、咸，微寒。归肝、大肠经。决明子在全国南北各地均有栽培，主产于安徽、广西、四川、浙江、广东等地，秋季采收成熟果实，晒干，打下种子，除去杂质。生用，或炒用。决明子为常用中药，具有清肝明目、润肠通便的作用，还具有降血压、降血脂、保肝、抑菌和泻下等活性。文献报道[1,2]决明和小决明的种子均含蒽醌类、萘骈-吡咯酮类、脂肪酸类、氨基酸和无机元素，主要成分为蒽醌类成分，含量约占1%。对决明子有效成分的提取研究报道很多，多采用乙醇等有机溶剂提取[3～6]。本文同时以水和乙醇为溶剂，分别采用正交实验对决明子药材进行提取，考察两种溶剂对总蒽醌提取的影响，为决明子配方颗粒的制备提供工艺参考。
1 仪器与材料
1.1 仪器uv1101紫外-可见分光光度计(上海天美科学仪器有限公司);auw220d电子天平(日本岛津公司);re52cs-1旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);hh-6恒温水浴锅(江苏金坛宏华仪器厂);tc-15恒温电热套(海宁市华星仪器厂)等。
1.2 材料决明子(广州致信中药饮片有限公司提供。产地：广东，批号： 071220);1，8-二羟基蒽醌(中国药品生物制品检定所，批号：0829-9702);所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 正交实验设计称取决明子粉末(过40目筛)5 g，分别以水和乙醇为溶剂，按照4因素3水平正交设计进行实验，因素水平见表1和表2，实验安排见表3和表5。提取后，滤过，滤液用蒸发皿收集，在水浴上浓缩至干，再于温度设为50℃的烘箱中烘干7～8 h，得到干膏，并恒重。
表1 水提正交实验因素水平
水平a浸泡时间t/hb提取时间t/minc提取次数/次d固液比/倍10303820.51021231260110
表2 醇提正交实验因素水平
水平a乙醇浓度(%)b提取温度t/℃c提取时间t/hd固液比/倍1306016250701.5837080210
2.2 含量测定
2.2.1 1，8-二羟基蒽醌对照品溶液的制备准确称取1，8-二羟基蒽醌对照品10.71 mg，至50 ml量瓶中，加乙醇溶解、定容、摇匀。1，8-二羟基蒽醌的含量为0.214 2 mg/ml。
2.2.2 最大吸收波长的测定精密吸取1，8-二羟基蒽醌对照品溶液适量于10 ml量瓶中，挥干溶剂，残渣加0.5%的mg(ac)2-乙醇溶液溶解并稀释至刻度、摇匀，以相应试剂作空白，照紫外-可见分光光度法，在200～600 nm范围内进行光谱扫描，考察其最大吸收波长。结果显示在515 nm处有最大吸收，故确定515 nm为测定波长。
2.2.3 标准曲线的绘制精密吸取1，8-二羟基蒽醌对照品溶液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8 ml至10 ml量瓶中，水浴蒸干，残渣加0.5%的mg(ac)2-乙醇溶液溶解并稀释至刻度、摇匀，以相应试剂作空白，照紫外-可见分光光度法，在515 nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：a= 4.428 4c -0.014 4(r=0.999 8)。
2.2.4 供试品溶液的制备及总蒽醌含量的测定准确称取相当于1 g 原药材的干膏，置圆底烧瓶中，加浓度为10%的盐酸溶液40 ml，置水浴中加热水解2 h，立即冷却，滤过，用120 ml三氯甲烷分4次萃取，30 ml/次，观察三氯甲烷层萃至无色，合并三氯甲烷液，水洗至中性，回收三氯甲烷，残渣用三氯甲烷溶解，转移至25 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀即得。
取相应供试品溶液适量，挥干溶剂，残渣加0.5%的mg(ac)2-乙醇溶液溶解并稀释至刻度、摇匀，以相应试剂作空白，照紫外-可见分光光度法，在最大吸收波长515 nm处测定吸光度。
2.3 正交实验结果及方差分析
2.3.1 水提正交实验以总蒽醌为考察指标，正交试验结果及方差分析见表3和表4。表3 水提正交实验设计及结果表4 水提方差分析
由表3和表4的分析结果可知，在决明子的总蒽醌水提工艺中，各因素对提取效果的影响程度依此是提取时间>提取次数>浸泡时间>固液比，在方差分析中该4个因素对总蒽醌的提取影响均不显著。最佳工艺为a1b2c1d2，即不浸泡，12倍量的水回流提取10 min，提取3次。
2.3.2 醇提正交实验以总蒽醌为考察指标，提取次数均为2次。正交实验结果及方差分析见表5和表6。表5 醇提正交实验设计及结果表6 醇提方差分析
由表5和表6的分析结果可知，在决明子的总蒽醌醇提工艺中，各因素对提取效果的影响程度依此是乙醇浓度>提取时间>固液比>提取温度，在方差分析中乙醇浓度、提取时间和固液比3个因素具有统计学意义，其中以乙醇浓度的影响最为显著，所选提取温度影响不大。最佳工艺为a2b3c3d2，即用8倍量，浓度为50%的乙醇在80℃下回流提取2 h，提取2次。
3 讨论
对比决明子总蒽醌的水提和醇提工艺，在得膏率方面水提高于醇提，原因是水的极性大，易把蛋白质、糖、无机盐等易溶于水的物质提取出来，该指标对生产实践有一定的参考作用。
在总蒽醌的提取量方面，醇提的效果明显优于水提。决明子总蒽醌的提取最佳工艺条件可选用8倍量，浓度为50%的乙醇在80℃下回流提取2 h，提取2次。该工艺条件稳定，总蒽醌的提取效率较高，生产成本适中，可用于生产实际。
中药成分复杂，将总蒽醌这一成分指标同药效结合起来进行工艺优化还有待进一步的研究。
【参考文献】
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