【摘要】 目的建立急性子药材指纹图谱,全面控制急性子药材质量。方法采用高效液相色谱法建立8个不同地区急性子药材的指纹图谱。结果在选定的色谱条件下,标定出13个共有峰。结论该方法稳定、可靠,可用于急性子指纹图谱的建立。
【关键词】 急性子; 指纹图谱; 高效液相色谱法
急性子为凤仙花科植物凤仙花impatiens balsamina l.的干燥成熟种子,夏秋种子即将成熟时采收。急性子具有软坚消积、降气行癖、透骨通筋活血的作用[1]。急性子来源丰富,全国各地均有栽培,为了考察其化学成分的差异,我们建立了急性子8批药材的指纹图谱。指纹图谱技术作为一种多组分复杂样品的有效质量方法,能够反映出待测样品的整体性、特征性,通过急性子药材的指纹图谱研究,为该药材的全面质量控制建立了有效的方法,为不同产地急性子的鉴别及应用提供技术支持。
1 仪器、试剂与药材
美国agillent 1100 高效液相色谱仪,二级阵列检测器。乙腈为色谱纯,水为娃哈哈纯净水。8批样品分别为山东、河南、西安、湖北、安徽、沈阳、四川、北京的药材,药材来源见表1。表1 急性子药材来源(略)
2 方法
2.1 色谱条件色谱柱为迪马公司c18(4.6 mm×200 mm);流动相: 0.1%甲酸(a)- 乙腈(b),梯度洗脱程序为(b);0~15 min,25 %~90 %;15~20 min,90%,20.01~25 min,25%。www.lunwen.net.cn体积流量为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为260 nm。
2.2 供试品溶液制备取急性子药材粉末1.0 g,精密称定,置三角瓶中,精密加入甲醇20 ml,称重,过滤,超声提取20 min,取出,放凉,称重(必要时补足所失重量,摇匀),滤过,取续滤液经微孔滤膜滤过,溶液备用。
2.3 测定方法分别精密吸取不同地区(山东,河南,西安,湖北,安徽,沈阳,四川,北京)的急性子药材试品溶液5 μl,注入高效液相色谱仪,记录25 min 的色谱图即得。供试品色谱图中,以色谱峰(s峰)的保留时间和峰面积为参照,计算各指纹峰的相对保留时间和峰面积比值。
2.4 分析时间考察吸取供试品溶液s6溶液5 μl,注入高效液相色谱仪,运行55 min,记录色谱图,发现25 min以后已无明显色谱峰,因此分析时间定为25 min。
3 结果与分析
3.1 指纹图谱及技术参数[2]
3.1.1 共有峰的标定本实验以急性子的急黄新苷色谱峰为参照,确定其相对保留时间为1,计算其他主要色谱峰的相对保留时间,标定出13 个共有峰,分别为:①1.000;②(1.060±3.7)%;③(1.119±4.3)%;④(1.198±15.8)%;⑤(1.394±10.2)%;⑥(1.490±2.4)%;⑦(1.610±13.3)%;⑧(1.985±2.7)%;⑨(2.272±4.0)%;⑩(2.827±1.4)%;(3.059±1.5)%;(3.378±0.81)%;(3.805±1.01)% ,结果见表2,指纹图谱见图1。表2 hplc -紫外指纹图谱相对保留时间(略)
3.1.2 共有峰面积比值 以急黄新苷面积作为1,计算各共有指纹的相对峰面积,结果各相对峰面积差异较大,表明不同地区的药材质量之间存在较大的差别。结果见表3。表3 hplc-紫外指纹图谱相对峰面积(略)
3.1.3 谱峰匹配 本实验根据样品相对保留时间,结合样品指纹图谱的谱峰形状特点对标定的共有峰进行匹配。结果所标定13个共有峰匹配无误,见图2。
3.2 方法学考察
3.2.1 稳定性考察 取同一份供试品溶液,分别在0,2,4,8,16,24 h考察各共有峰的相对保留时间及相对峰面积,结果表明,24 h内样品稳定性良好。
3.2.2 精密度考察 取同一份供试品溶液,连续进样5次,考察各共有峰的相对保留时间及相对峰面积,rsd分别为0~1.07 %和0~1.09 %,结果表明,仪器精密度良好。
3.2.3 重复性考察 取药材5份,按确定的实验方法操作,分别进行测定,考察各共有峰的相对保留时间及相对峰面积,rsd分别为0~1.07 %和0~1.08 %,结果表明,方法重复性良好。
3.3 急性子的指纹图谱的建立、分析与评价 对8份急性子供试品的色谱分离图进行叠加比较可以看出,8份急性子的供试品hplc指纹图谱具有较高的一致性,它们可作为鉴别急性子的必要条件之一。由表2可以看出13个峰相对峰面积相差较大,说明其生长条件不同;相同化学成分的含量有所不同,即药材质量间存在一定的差异,因此对不同的急性子供试品共有指纹峰的相对面积进行比较,可以鉴别不同来源急性子的质量。
4 结论
采用hplc法分别建立药材hplc-紫外指纹图谱,方法简单,重复性好,检测灵敏度高。
【参考文献】
[1] 胡喜兰,朱 慧,刘存瑞,等.凤仙花的化学成分研究[j].中成药,2003,25(10):833.
[2] 狄留庆,刘圣金,赵晓莉,等.杜仲药材hplc指纹图谱及其共有模式的建立[j].中草药,2007,38(4):596.
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