原花青素对乙型肝炎病毒抗原与抗体表达的影响有哪些(青霉素本身并不具有抗原性)

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【关键词】 花青苷类;乙型肝炎病毒;生物学标记

【摘要】 目的 探讨原花青素对乙型肝炎病毒抗原与抗体表达的影响。方法 体外实验：将乙型肝炎病人血清加入不同剂量的葡萄原花青素(gpc),于37 ℃下作用12 h后用elisa法测定乙型肝炎病毒血清标志物(hbvm)的吸光度值。临床试验：选择处于非活动期的慢性乙型肝炎病毒携带者20例，随机分为治疗组和对照组，每组10例。治疗组给予gpc 100 mg/d，对照组不给药，连续4周，在试验前后分别检测乙型肝炎病毒七项指标。结果体外实验：在培养12 h后，各剂量gpc组与对照组相比，各项指标的表达水平差异均无显著性。临床试验：治疗组试验后hbcigm和hbsab的表达水平较对照组升高，而pres1和hbsag则较对照组显著降低(t=2.340～4.885，p<0.05)。结论 gpc可能对乙型肝炎病毒有一定的抑制作用。

【关键词】 花青苷类;乙型肝炎病毒;生物学标记

　　the effect of procyanidin on expression of hepatitis b virus antigen and antibody yin lu, wang zheling, zhong jinyi (qingdao university medical college, qingdao 266003, china); [abstract] objective to investigate the effect of grape procyanidin (gpc) on the expression of hepatitis b virus (hbv) antigen and antibody. methods invitro assay: different doses of gpc were added in serum of hb patients and cultured at 37 ℃ for 12 hours. the absorbance of hbv serum marker was then detected by elisa. clinical trial: twenty hbv carriers were enrolled and evenly randomized to treatment and control groups. patients in treatment group were medicated with 100 mg/d, continuous for four weeks; no medication was offered to those in the control. pres1, hbsag, hbsab, hbeag, hbeab and hbcab were detected before and after experiment. results invitro assay showed that no significant differences between the two groups in terms of various indexes of hbv above mentioned of differentdose groups; for clinical trial: the expression levels of hboigm and hbsab were higher than that in the control, and that of pres1 and hbsag were lower (t=2.340-4.885,p<0.05). conclusion gpc might play a certain role in suppressing hepatitis b virus.

　　[key words] anthocyanins; hepatitis b virus; biological markers

　　目前，全球慢性乙型肝炎病毒(hbv)感染者已多达3.6亿，我国则占1.2亿。慢性hbv感染者中的50%～75%有活跃的病毒复制和肝脏炎症改变，但尚未有令人满意的治疗方法。慢性乙型肝炎病人的抗病毒治疗药物也存在疗效低或耐药的问题，目前亟需探索抗hbv治疗的新方法或联合治疗方案[1]。本研究旨在探讨葡萄原花青素(gpc)在体内外对hbv影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 主要材料

　　co2恒温培养箱为日本tabaiesoec公司产品;elisa放免试剂盒由北京晶美生物工程有限公司提供;gpc为青岛海隆达生物科技有限公司产品;gpc样品和胶囊为本研究室自制。

　　1.2 体外实验

　　取11例乙型肝炎病人的血清各50 μl，分别加入终浓度为50、100、200 mg/l的gpc各50 μl，在37 ℃共同培养12 h。对照组不给gpc，只加50 μl生理盐水。各组均采用elisa测定试剂盒分别检测hbv血清标志物(hbvm)，操作方法按试剂盒说明书进行。

　　1.3 临床试验

　　1.3.1 病例选择 根据2000年西安学术会议制定的《病毒性肝炎防治方案》诊断标准，选择处于非活动期的hbv携带者20例，两两匹配后随机分为治疗组和对照组各10例。两组病人年龄、性别、病程、病情严重程度等差异无显著性。参加试验者均知情同意。

　　1.3.2 治疗方法及检测指标 治疗组给予gpc胶囊100 mg/d，温开水送服;对照组不给药，连续4周。试验期间两组均正常生活与工作，均不服用其他抗病毒和乙型肝炎治疗药物。两组均于试验开始和试验结束当天清晨采集空腹静脉血5 ml，取血清用elisa法测hbv七项指标：前s1抗原(pres1)、乙型肝炎表面抗原(hbsag)、乙型肝炎表面抗体(hbsab)、乙型肝炎e抗原(hbeag)、乙型肝炎e抗体(hbeab)、乙型肝炎核心抗体(hbcab)及乙型肝炎核心抗体igm(hbcigm)。

　　1.4 统计学处理

　　采用spss 13.0及ppms 1.5[2]软件进行统计学处理，组间比较采用方差分析、t检验。

　　2 结 果

2.1 体外实验

　　体外培养12 h后，各组间各项指标比较差异均无显著性(p<0.05)。见表1。

　　2.2 临床试验

　　治疗组病人试验后pres1、hbcigm、hbsag、hbsab的表达与对照组相比，差异有显著意义(t=2.340～4.885,p<0.05)。见表2。表1 各组乙型肝炎相关抗原抗体结果比较表2 两组实验前后乙型肝炎各指标检测结果比较

　　3 讨 论

　　原花青素是植物王国中广泛存在的一大类多酚类化合物的总称，具有多种生物活性，葡萄、苹果、樱桃等植物中均含有原花青素，其中以葡萄含量最为丰富，尤其是葡萄籽和皮中含量最多。目前研究发现，其具有抗氧化、保护心血管系统、抗肿瘤和抗炎等多方面生物学活性[3]。在观察原花青素对·oh引起的鼠肝线粒体损伤影响的研究中发现，原花青素能有效增加受损伤的线粒体的膜脂流动性，明显减少受损伤的线粒体肿胀及脂质过氧化物的形成，从而维护线粒体结构和功能的完整性[4]。丛红群等[5]研究结果显示，葡多酚可明显抑制n亚硝基化合物诱发大鼠肝细胞p53基因突变率和降低微核率，对n亚硝基化合物的诱变性具有良好的防护作用。另外，原花青素还可能具有一定的抗微生物活性。subathira等[6]研究原花青素对反刍动物瘤胃细菌的影响时也显示，上述细菌对原花青素非常敏感，即使在100 mg/l时也能产生抑制作用。nair等[7]研究表明，葡萄籽原花青素能抑制hiv1病毒在外周血单核细胞中的复制和表达，可显著降低趋化受体的表达，并呈剂量依赖性。

　　pres1抗原具有吸附于肝细胞受体的表位，其抗原性比hbsag更强，消除该抗原能阻断hbv与肝细胞结合而起到抗病毒作用。hbsag是hbv感染的主要标志，hbsag具有抗原性，可引起机体产生特异保护性的hbsab[8]。hbcigm 的存在常提示病毒处于复制状态。hbcab在血中持续时间较长，为非保护性抗体。hbeag 为hbv复制的重要指标，存在于hbsag阳性者血液中，与 hbv携带者的传染性有关。hbeab对hbv感染有一定保护作用，它的出现是预后良好的征象。

　　本研究体外实验结果显示，各组间各指标差异无显著性，提示gpc离开了体内环境在体外无抗hbv活性。而临床试验结果显示，用药后pres1、hbcigm、hbsag以及hbsab的表达与对照组相比差异有显著意义，可能提示gpc具有一定的抑制pres1、hbsag合成或分泌，刺激hbcigm、hbsab产生的作用，在体内具有一定的抗hbv活性，但其确切作用机制尚需进一步研究。

【参考文献】
　　[1]杜镭,闫兆平. 慢性乙型肝炎抗病毒治疗进展[j]. 青岛大学医学院学报, 2009, 45(1):8990,93.

　　[2]周晓彬,纪新强,徐莉. ppms 1.5统计软件的功能及其应用[j]. 青岛大学医学院学报, 2009,45(1):9193.

　　[3]赵艳,吴坤. 原花青素生物学作用研究进展[j]. 中国公共卫生, 2006,22(1)：110111.

　　[4]陈季武,朱振勤,苏裕,等. 原花青素对·oh致损的鼠肝线粒体的保护作用[j]. 华东师范大学学报：自然科学版, 2004(2): 9296.

　　[5]丛红群,成汉义,钟进义. 葡多酚对n亚硝基化合物诱变性的抑制作用[j]. 癌变·畸变·突变, 2004,16(1):3033.[6]subathira s, abdul l m, lucy p m, et al. variation in antimicrobial action of proanthocyanidins from dorycnium rectum against rumen bacteria[j]. phytochemistry, 2004,65(4):24852497.

　　[7]nair m p, kandaswami c, mahajaw s, et al. doublebind study on endotelen in chronic venous insuficiency[j]. biol res, 2002,35(34)：421431.

　　[8]王新,张京秀,倪苑. 药物抑制乙肝病毒血清标志物的实验研究[j]. 天津医药, 2001,29(2):9798.

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