作者：毛晓健 原雪 卢桂萍 赵杰
【摘要】 目的观察中药复方红袍胃安通过正交设计法按方药组成君、臣、佐、使拆分出的部分组方对小鼠胃排空、肠推进的影响和对大鼠胃液分泌等指标的影响,评价出该复方拆方后的最有效的精简组方，为进一步研发打下基础。方法采用综合法造成大鼠慢性胃炎模型，大鼠幽门结扎法分析胃液，蛋清毛细管法，小鼠胃排空及肠推进等实验方法。结果造模动物经给药后，除方10(厚朴+马蹄香+甘草)外，胃液分泌量均显著降低;方3(延胡索+隔山消+陈皮+苍术)、方4(甘草)和方9(厚朴+马蹄香+延胡索+隔山消+陈皮+苍术)能显著降低胃液的总酸度，方2(厚朴+马蹄香)和方11(延胡索+隔山消+陈皮+苍术+甘草)降低胃液总酸度的作用次之;方5(全方)有增强的趋势，方7(大红袍+白术+延胡索+隔山消+陈皮+苍术)和方8(大红袍+白术+甘草)有降低胃蛋白酶活性的趋势;给药组方2(厚朴+马蹄香)、方5(全方)、方6(大红袍+白术+厚朴+马蹄香)的作用与香砂平胃组相当,能增强小鼠对酚红的排空率，方3，7，9，10，11能减慢小鼠的胃排空率;给药组方5、方6与香砂平胃阳性药组比，其作用相当，能显著促进小肠推进运动。结论综合以上实验结果得出，方6(大红袍+白术+厚朴+马蹄香)药效作用与全方最为接近。
【关键词】 红袍胃安; 拆方分析; 药效研究
abstract:objective to separate hongpao weian prescription according to principles of principal , assistant, complement and guide. to observe the effects of separated ones on gastric emptying and intestine propulsion in mice on gastric juice secretion volume in se the best simplified separated prescription ,which may present a foundation for its further study. methodschronic gastritis model in rats was induced by composite methods, gastric juice after pylorus was ligated of model rats, and the methods of egg white capillary, gastric emptying and intestine propulsion in mice were sall separated prescriptions except the 10th one (cortex magnoliae officinalis,valeriana jatamansi, glycyrrhiza ) obviously decreased the gastric juice volume in model animals; the 3rd (rhizoma corydalis,geranium strictipes r. knuth,pericarpium citri reticulatae,atractylodes lancea),4th(glycyrrhiza) and 9th prescription (cortex magnoliae officinalis,valeriana jatamansi、rhizoma corydalis geranium strictipes r. knuth,pericarpium citri reticulatae,tractylodes lancea;) obviously decreased total acidity of gastric juice, the 2nd (cortex magnoliae officinalis,valeriana jatamansi) and 11th(rhizoma corydalis, geranium strictipes r. knuth, pericarpium citri reticulatae, atractylodes lancea, glycyrrhiza) one had weaker effect; the 5th(original prescription) had the tendency of increasing acidity,the7th(da hongpao,atractylodes macrocephala,rhizoma corydalis,geranium strictipes ,pericarpium citri reticulatae,atractylodes lancea)and the 8th(da hongpao , atractylodes macrocephala, glycyrrhiza) had the tendency of decreasing activity of gastric protease; the 2nd,5th(original prescription) and 6th(da hongpao,atractylodes macrocephala,cortex magnoliae officinalis,valeriana jatamansi) could speed up phenol-red emptying rate in rats as well as xiangshapingwei group, the 3rd,7th,9th,10th and 11th prescription had opposite effects ;the 5th,6th prescription can obviously speed up intestine propulsion ,which was correspond to positive control group. conclusionpharmacological effects of the 6th prescription is most up to its original one.
key words:hongpao weian; prescription dismantlement study; pharmacology
本方经前期研究的实验结果表明：红袍胃安能增强胃肠运动，解除胃肠痉挛，显著抑制胃液分泌，降低胃液中总酸排出量，有增强胃蛋白酶活性的趋势[1];还能显著增加胃壁粘液量和胃游离粘液量，而对胃粘膜血流量影响不明显[2]，但能延长小鼠凝血时间，显著增强小鼠的单核巨噬细胞吞噬功能，增加免疫器官重量及抗炎、镇痛、镇静等药理作用[3]。为其具有健脾燥湿，行气止痛之功效提供了实验依据。但由于时间经费的限制，还存在服用量大，全方药味较多，不利于制剂及质量控制，不适宜大生产及进一步的研发，因此，拟进行进一步的拆方研究，分析筛选有效药物，精减处方以利于进一步的研发。现报道如下。
1 材料与仪器
1.1 药物均购自云南省药材公司。经鉴定为：大红袍为豆科杭子梢属植物毛杭子梢campylotropis hirtella(fr.)schindl.的根;隔山消为牻牛儿苗科植物紫地榆geranium strictipes 的根;马蹄香为败酱科植物心叶缬草valeriana jatamansii jones的根茎。白术、苍术等其他药材均符合药典要求。
1.2 动物sd大鼠，体重200～270 g，雌雄兼用，动物合格证号：200604;km小鼠，体重18～22 g,雌雄兼用，动物合格证号：20060404，均由昆明医学院实验动物中心提供。
1.3 试剂均为市售合格试剂。
1.4 仪器 tgl-20m台式高速冷冻离心机(长沙天创仪器制造有限公司);pb-10型ph计(北京赛多利斯仪器系统有限公司);uv-2450型分光光度计(日本岛津);pl403型 电子 天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)。
2 方法
2.1 拆方分析按照正交设计法及方药组成君、臣、佐、使拆方组成12个组〔l8(27)表一阶交互考虑，1/2实施比例〕，即:方1： 君药(大红袍+白术);方2： 臣药(厚朴+马蹄香);方3： 佐药(延胡索+隔山消+陈皮+苍术);方4： 使药(甘草);方5： 全方(大红袍+白术+厚朴+马蹄香+延胡索+隔山消+陈皮苍术+甘草);方6： 君药+臣药(大红袍+白术+厚朴+马蹄香);方7： 君药+佐药(大红袍+白术+延胡索+隔山消+陈皮+苍术);方8： 君药+使药(大红袍+白术+甘草);方9： 臣药+佐药(厚朴+马蹄香+延胡索+隔山消+陈皮+苍术);方10：臣药+使药(厚朴+马蹄香+甘草);方11：佐药+使药(延胡索+隔山消+陈皮+苍术+甘草);方12：空白对照组。
2.2 分组及药液制备
2.2.1 实验大鼠分组情况随机分为15组：即拆方的12个组、两个阳性药对照组(香砂平胃颗粒和雷尼替丁胶囊)和模型对照组。
2.2.2 实验小鼠分组情况均随机分为13组：即拆方的12个组和阳性药对照组(香砂平胃颗粒)。
2.2.3 给药剂量均为临床人用量的25倍(按公斤体重折算)，灌胃给药，1次/d。
2.2.4 药液制备按原处方剂量称取各组药材分别用冷水浸泡20 min,煮沸后再煎煮30 min,双层纱布过滤,药渣再加水煮沸20 min,过滤,合并两次滤液,浓缩至所需的体积,置冰箱内4℃保存备用。
2.3 统计学处理实验数据符合正态分布，方差齐者：用t检验;方差不齐者：用t′检验。实验数据如有偏态，则用参比差值法。数据均用spss12.0软件处理。
2.4 慢性胃炎模型的制备[4]大鼠雌雄各半，随机分为15组，即正常对照组、模型对照组、各药物组，每组10只，每5只一笼，雌雄分笼喂养。第1个月每隔5 d，第2个月每隔7 d，经口灌服60%的乙醇溶液一次，每次每只2 ml，其间以ph 7.0～7.8、20 mmol/l去氧胆酸钠溶液取代水随意饮用，第3个月分别用30%乙醇溶液及20 mmol/l去氧胆酸钠溶液，每隔3 d轮换1次随意饮用。
2.5 对大鼠幽门结扎型胃液分泌的影响[5]按 文献 方法进行慢性胃炎模型造模3个月后，第4个月开始给大鼠灌胃给药，连续灌服30 d，末次给药前禁食24 h，禁食期间可自由饮水，于末次给药前在乌拉坦麻醉下施幽门结扎术。结扎好立即十二指肠给药，空白组给等体积的生理盐水，然后缝合腹壁切口，停止供食供水，结扎后6 h处死大鼠，摘取胃并收集胃液于离心管，以3 000 r/min，离心15 min， 计算 胃液量，取上清液作胃液分析(酸碱滴定法)。在胃内注入10 ml 10%福尔马林固定，用线扎紧食道，让胃充分展开，作病理切片检查。
胃液分析：①ph值测定：将胃液倒入1 ml小烧杯中，用自动电位滴定计测定胃液的ph值，(对于胃液量少于1 ml者用精密ph试纸测定ph值);②胃酸测定：(酸碱中和滴定法)取胃液2 ml置于小三角烧瓶中，加入酚酞2滴，用滴定管慢慢用0.02 mol/l naoh滴定，同时不断摇动，滴定至微红色不退为止，即为总酸度滴定终点，记录滴定耗naoh毫升数。计算总酸度(μeq/l)=消耗naoh总毫升数×10。结果见表1。表1 对大鼠胃液分泌的影响与空白组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01;与模型对照组比较，◆p﹤0.05，◆◆p﹤0.01;与雷尼替丁组比较，△p﹤0.05，△△p﹤0.01;与香砂平胃组比较，★p﹤0.05，★★p﹤0.01;n=10
结果表明：实验动物经造成慢性胃炎的模型后，胃液总酸度和胃液分泌量显著降低(p<0.05)，对胃液ph值影响不显著。造模动物经给药后，除方10外，胃液分泌量均显著降低;方3、方4和方9能极显著降低胃液的总酸度(p<0.01)，方2和方11降低胃液总酸度的作用次之(p<0.05),其余各组均不显著。
2.6 在体胃蛋白酶活性测定(mett氏改良法)[5]用定量吸血毛细管灌满蛋清(注意管内应无气泡)。然后放在85℃热水中使蛋白凝固，实验时取上述幽门结扎大鼠的胃液0.3 ml放入10 ml的试管中，加0.05 mol/l的hcl溶液4.5 ml摇匀，放进5 cm长蛋白管两根，在37℃恒温水浴中孵育24 h，取出蛋白管，测量蛋白管两端透明部分的长度(mm)，以四端之值取平均值。胃蛋白酶活性单位=平均值2×16。经统计比较。结果见表2。表2 对大鼠胃蛋白酶活性的影响
结果表明：与模型对照组比较，对胃蛋白酶活性影响：实验动物经造成慢性胃炎的模型后影响不显著，方5有增强的趋势，方7和方8有降低胃蛋白酶活性的趋势。其余各给药组均不显著。(由于胃液量的限制，测定胃蛋白酶的例数较少，甚至有的组没有足够的胃液测定该指标，所以现做以简单说明，用t检验或tˊ检验的统计方法来说明药物作用的大体趋势)。
2.7 对小鼠胃排空运动的影响[5](比色法)取小鼠130只，雌雄均用，随机分为13组，分组及给药方法如前所述，连续灌胃给药7 d，第6天开始禁食24 h，末次给药为皮下注射，30 min后灌服0.1%的酚红溶液0.2 ml/只，20 min后脱臼处死动物，剖腹摘取胃置于培养皿中，加入10 ml蒸馏水，用小剪刀沿胃大弯剪开胃，将胃内容物充分洗于蒸馏水中，倒入试管，以2 000 r/min离心10 min，取上清液4 ml加2 ml 0.5 mol/l naoh显色，用uv-2450型分光光度计测其光密度(560 nm)。以胃中酚红残留量(od值)为指标,计算酚红排空率〔酚红排空率(%)=1-实验组od值/零点对照od值〕 经统计比较。结果见表3。表3 对小鼠胃酚红排空的影响与空白组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01;与香砂平胃组比较，★p﹤0.05，★★p﹤0.01
结果表明，与空白和香砂平胃组比较,给药组方2，方5，方6的作用与香砂平胃组相当,能增强小鼠对酚红的排空率。方1，方4和方8影响不明显,方3，7，9，10，11能减慢小鼠的胃排空率。
2.8 对小鼠小肠推进率的影响[5](炭末法)取小鼠130只，随机分为13组，分组及给药方法如表所述，连续灌胃给药7 d，第6天开始禁食24 h，于末次给药(各药中加入5%炭末作指示剂)15 min后脱颈处死，立即剖腹分离肠系膜，剪取上至幽门，下至回盲部的肠管，轻轻理成直线，测量小肠全长及炭末推进的距离，用下列公式计算推进率：推进率(%)=炭末在小肠内距离/小肠总长×100%。结果见表4。
结果表明，与空白组比较，给药组除方2，方4外，能显著促进小肠推进运动。与香砂平胃组比较，给药组方5，方6与其作用相当。表4 对小鼠小肠推进率的影响与空白组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01;与香砂平胃组比较，★p﹤0.05，★★p﹤0.01
3 小结与讨论
综上所述，红袍胃安经过拆方后，方6(君药+臣药)能显著抑制胃液分泌，降低胃液中的总酸度，显著促进肠推进和胃排空的作用，但对胃蛋白酶活性影响不明显。
慢性胃炎多属脾胃虚寒，常表现为胃肠功能低下，消化不良等，临床镜检及病变程度多表现为胃液量少，局限性粘膜充血等。针对慢性胃炎的一些表现及本中药复方的功效，拟定了方剂药效学方面的几个指标，来考察红袍胃安经过拆方后最有效的药味组合。结果表明，拆方后的11个方中，方6(君药+臣药)与全方的功效相近：能显著抑制胃液分泌，降低胃液中的总酸度，显著促进肠推进和胃排空的作用，但对胃蛋白酶活性影响不明显。结合前期的研究结果，将进一步对方6进行作用机制的研究加以验证其有效性。
【 参考 文献】
[1] 毛晓健，毛小平，徐 晶，等.红袍胃安的部分药效研究[j].中医药学刊,2004，5(2)：863.
[2] 毛晓健，陈凌云，耿润贤.红袍胃安胶囊对胃液分泌及胃粘膜血流量影响的实验观察[a].全国高等中药 教育 研究会，成都中医药大学.首届全国临床中药学学术研讨会 论文 集[c].2004：200.
[3] 毛小平，毛晓健，陈凌云，等.红袍胃安抗炎及对免疫的影响[a].全国高等中药教育研究会,成都中医药大学.首届全国临床中药学学术研讨会论文集[c].2004：200.
[4] 陈 奇.中药药理实验方法学[m].北京：人民卫生出版社,1993:857，859 ，334.
[5] 王金萍，边佳明，方 杰. 连夏消痞胶囊药效学研究[j].
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